Cecr2基因的分子克隆以及其在雞胚發(fā)育中的初步功能探索.pdf

1、Cecr2基因來(lái)自于貓眼綜合癥染色體區(qū)域，先前的研究表明Cecr2蛋白可與SNF2L形成染色質(zhì)重構(gòu)復(fù)合物CERF。Cecr2在小鼠的突變導(dǎo)致露腦畸形，相當(dāng)于人類(lèi)的無(wú)腦畸形，表明此基因可能參與神經(jīng)管形成的過(guò)程。通過(guò)RT-PCR，我們得到了雞的Cecr2基因的cDNA序列全長(zhǎng)并將其投到了基因數(shù)據(jù)庫(kù)。其cDNA全長(zhǎng)共4419bp。序列分析表明它含有“AT勾”以及“Bromo域”。通過(guò)對(duì)不同物種之間Cecr2基因序列的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)Cecr2基因的

2、“AT勾”和“Bromo域”在不同物種之間是高度保守的。含有“AT勾”和“Bromo域”是染色質(zhì)重構(gòu)蛋白的基本特征，表明Cecr2基因在不同物種之間可能通過(guò)保守的染色質(zhì)重構(gòu)來(lái)發(fā)揮其在生物體中的作用。進(jìn)一步，通過(guò)原位雜交研究了Cecr2基因在雞胚胎發(fā)育中的表達(dá)模式。除在神經(jīng)管形成中主要表達(dá)在神經(jīng)組織外，Cecr2還主要表達(dá)在發(fā)育中的肌節(jié)以及脊髓的中間區(qū)。表明Cecr2功能可能涉及到肌節(jié)的發(fā)育以及神經(jīng)元的分化。為了進(jìn)一步研究Cecr2基因在

3、肌肉發(fā)生中的作用。比較了它與其他肌肉發(fā)生標(biāo)志基因如Pax7、Frek、MyoD、Myf5、Myogenin在體節(jié)中的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Cecr2基因與這些肌肉發(fā)生標(biāo)志基因在體節(jié)中有著不同的表達(dá)模式。所以，Cecr2基因可能不參與肌肉發(fā)生基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控。但同時(shí)，Cecr2在肌節(jié)的表達(dá)模式與肌節(jié)發(fā)育中第二波細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)動(dòng)態(tài)相吻合，意味著Cecr2基因可能參與第二波肌節(jié)發(fā)育。為了更多的了解Cecr2在胚胎發(fā)育中的作用，設(shè)計(jì)，制備并測(cè)試了基于質(zhì)粒

4、載體的Cecr2基因的RNA干擾系統(tǒng)。首先把這些RNA于擾質(zhì)粒利用電穿孔技術(shù)導(dǎo)入到雞胚的神經(jīng)管或體節(jié)中，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的孵化后，通過(guò)綠色熒光蛋白的指示，發(fā)現(xiàn)shRNA成功的表達(dá)在手術(shù)側(cè)神經(jīng)管或體節(jié)中。對(duì)這些手術(shù)后的胚胎用Cecr2探針進(jìn)行原位雜交發(fā)現(xiàn)Cecr2基因的表達(dá)在手術(shù)側(cè)被成功的抑制了。而在對(duì)照組，Cecr2基因在對(duì)照側(cè)和手術(shù)側(cè)的表達(dá)沒(méi)有明顯的不同。為了進(jìn)一步確認(rèn)Cecr2 RNAT擾的效果，用尼氏蘭進(jìn)行了細(xì)胞凋亡的測(cè)試，在手術(shù)側(cè)并