綿羊受精素β去整合素結構域的表達及其特異性抗體的制備.pdf

1、精卵結合機制的研究，一方面是動物受精生理的一個重要理論問題，另一方面在免疫避孕及免疫不孕等實際應用中也具有重要意義。受精素β作為少數幾種在精卵質膜結合與融合中發(fā)揮重要作用的精子膜表面蛋白之一，是多種哺乳動物精子膜均具有的重要蛋白。它屬于ADAMs家族，具有ADAMs家族的完整結構域。在受精素β的多個保守性結構域中，去整合素區(qū)域作為卵細胞上整合素的配體是其發(fā)揮重要生理功能的最主要的功能區(qū)。 本研究將綿羊受精素β作為外源性抗原，通過

2、基因重組技術將編碼受精素β去整合素結構域的cDNA序列插入表達載體高拷貝質粒PGEX—4T-1中，構建重組質粒PGEX—4T—sf279并轉化大腸桿菌BL21（DH3）中，成功地構建了能夠穩(wěn)定表達綿羊受精素β去整合素結構域蛋白的重組大腸桿菌疫苗株。本研究的主要結果和結論如下： 1、根據綿羊受精素βcDNA全序列設計其去整合素結構域上下游引物，利用PCR方法擴增編碼該區(qū)域的cDNA片段，將其插入原核表達載體PGEX—4T-1中，構

3、建重組質粒PGEX—4T—sf279； 2、將含綿羊受精素β去整合素結構域cDNA序列的重組質粒PGEX—4T—sf279轉化入大腸桿菌BL21（DH3）中，用IPTG誘導成功表達了大量融合蛋白，然后利用GST親和樹脂層析純化，制備了純度很高的蛋白抗原。 3、免疫6—8周齡昆明小鼠，制備了小鼠抗羊多克隆抗血清。經Western Blot分析顯示，多克隆抗血清可與純化的綿羊重組蛋白發(fā)生特異性反應，說明重組蛋白具有抗原活性。