綿羊受精素β去整合素結(jié)構(gòu)域的表達及其特異性抗體的制備.pdf

1、精卵結(jié)合機制的研究，一方面是動物受精生理的一個重要理論問題，另一方面在免疫避孕及免疫不孕等實際應(yīng)用中也具有重要意義。受精素β作為少數(shù)幾種在精卵質(zhì)膜結(jié)合與融合中發(fā)揮重要作用的精子膜表面蛋白之一，是多種哺乳動物精子膜均具有的重要蛋白。它屬于ADAMs家族，具有ADAMs家族的完整結(jié)構(gòu)域。在受精素β的多個保守性結(jié)構(gòu)域中，去整合素區(qū)域作為卵細胞上整合素的配體是其發(fā)揮重要生理功能的最主要的功能區(qū)。 本研究將綿羊受精素β作為外源性抗原，通過

2、基因重組技術(shù)將編碼受精素β去整合素結(jié)構(gòu)域的cDNA序列插入表達載體高拷貝質(zhì)粒PGEX—4T-1中，構(gòu)建重組質(zhì)粒PGEX—4T—sf279并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DH3）中，成功地構(gòu)建了能夠穩(wěn)定表達綿羊受精素β去整合素結(jié)構(gòu)域蛋白的重組大腸桿菌疫苗株。本研究的主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1、根據(jù)綿羊受精素βcDNA全序列設(shè)計其去整合素結(jié)構(gòu)域上下游引物，利用PCR方法擴增編碼該區(qū)域的cDNA片段，將其插入原核表達載體PGEX—4T-1中，構(gòu)

3、建重組質(zhì)粒PGEX—4T—sf279； 2、將含綿羊受精素β去整合素結(jié)構(gòu)域cDNA序列的重組質(zhì)粒PGEX—4T—sf279轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21（DH3）中，用IPTG誘導成功表達了大量融合蛋白，然后利用GST親和樹脂層析純化，制備了純度很高的蛋白抗原。 3、免疫6—8周齡昆明小鼠，制備了小鼠抗羊多克隆抗血清。經(jīng)Western Blot分析顯示，多克隆抗血清可與純化的綿羊重組蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，說明重組蛋白具有抗原活性。