家蠶BmY14蛋白的表達分析和亞細胞定位研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、從家蠶蛹期cDNA文庫中獲得一條序列長度為50.bp的cDNA，其編碼的166個氨基酸組成的蛋白質與已知的RNA結合蛋白Y14序列同源性較高，含有一個保守的RNA結合結構域，命名為家蠶類Y14基因BmY1.(Genbank登錄號為FJ602787)。該蛋白質預測分子量為18 kDa。我們將其ORF序列克隆到原核表達載體中，構建重組質粒，經雙酶切鑒定及序列測定正確后轉化大腸桿菌BL21(DE3)，用IPTG誘導成功表達該蛋白，并憑質譜鑒定

2、確定表達蛋白為目的蛋白。表達的融合蛋白經親和層析純化后，免疫兔獲得特異性強的多克隆抗體。利用該抗體以ELISA和Wester.blot檢測家蠶七個發(fā)育階段和五齡幼蟲多種組織或器官中BmY14蛋白的表達和分布，發(fā)現該蛋白在四齡、五齡幼蟲、蛹、蛾四個發(fā)育階段均有表達，其中蛹中表達量最高；各個組織或器官中，氣囊中表達量最高，其次是血液和生殖器。利用抗體的免疫熒光標記對家蠶Bm5細胞定位，觀察到熒光集中分布在細胞核。證實BmY14主要存在核中，

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