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文檔簡介
1、胰島素( insilin)和類胰島素多肽（insulin-related peptides）是調(diào)節(jié)生長和代謝過程中主要的激素，在脊椎動物和非脊椎動物中均發(fā)現(xiàn)了類胰島素多肽，包括哺乳動物、原索動物、線蟲、軟體動物和昆蟲。這些激素通過類似胰島素受體( insulin receptor)的異源四聚體跨膜受體酪氨酸蛋白激酶相互作用而發(fā)揮其功能。目前，國內(nèi)外對胰島素結(jié)合蛋白(insulin-related binding proteins, IB
2、P)的研究多數(shù)集中在脊椎動物上，而對非脊椎動物的研究很少。
我們從本實驗室構(gòu)建的家蠶蛹cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)了一條編碼類胰島素結(jié)合蛋白(insulin-related binding protein)的基因，我們將其命名為Bm IBP(Bombyx mori insulin-relatedbinding protein), GenBank登錄號為DQ443372.1。該基因的ORF為768bp，編碼255個氨基酸殘基，是由六個
3、外顯子和五個內(nèi)含子剪接而成。將推測的氨基酸序列進(jìn)行同源性( BlastP)比對，發(fā)現(xiàn)此蛋白序列含有兩個保守的IG domains，生物信息學(xué)預(yù)測其分子量為27.98kD，等電點為7.36。
我們利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了含有His標(biāo)簽的BmIBP融合蛋白，主要以包涵體形式存在。鎳柱純化后獲得較純的融合蛋白，將其為抗原免疫新西蘭白兔，制備該融合蛋白的多克隆抗體。ELISA檢測該抗血清（多克隆抗體）的效價可達(dá)到1:1280
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