精噁唑禾草靈和氰氟草酯酶聯(lián)免疫吸附測定方法研究.pdf

1、本研究以精噁唑禾草靈和氰氟草酯為研究對象，合成了精噁唑禾草靈半抗原Hapten-1和氰氟草酯半抗原Hapten-2。采用碳二亞胺法和活性酯法將半抗原分別與載體蛋白BSA和OVA共價偶聯(lián)，制備人工抗原，經紫外分析確定偶聯(lián)成功，Hapten-1與BSA和OVA偶聯(lián)比分別為：15:1和8:1，Hapten-2與BSA和OVA偶聯(lián)比分別為16:1和7:1。以Hapten-1-BSA和Hapten-2-BSA為免疫原免疫雄性新西蘭大白兔，分別獲得

2、了針對精噁唑禾草靈和氰氟草酯的特異性抗血清，以硫酸銨分步鹽析法分離抗血清中的抗體并冷凍干燥得抗精噁唑禾草靈抗體Ab1和抗氰氟草酯抗體Ab2凍干粉，間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法（ic-ELISA）測定凍干粉的效價分別為1.02×106和5.12×105。進一步研究了有機溶劑、pH值和離子強度在間接競爭ELISA中對精噁唑禾草靈和氰氟草酯與抗體親和作用的影響，確定了10％的甲醇和pH7.5、0.3mol/l鈉離子強度的磷酸鹽緩沖液為精噁唑禾草

3、靈和氰氟草酯間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法的最佳工作條件。
　　 利用制備的抗體，在優(yōu)化條件下分別建立精噁唑禾草靈和氰氟草酯ic-ELISA方法。精噁唑禾草靈ic-ELISA抑制反應曲線在0.005～5mg/L標樣濃度范圍與抑制率有較好線性關系，標準曲線的回歸方程為I=0.3567 log c+0.8835（I為抑制率，c為農藥濃度，R2=0.9922），IC50為0.0844±0.012 mg/L，最低檢測限（IC10）為0.0

4、064±0.002 mg/L，制備的抗精噁唑禾草靈抗體與其他結構類似的芳氧苯氧丙酸酯除草劑，除噁唑酰草胺外，交叉反應很小。氰氟草酯ic-ELISA抑制反應曲線在0.005～5mg/L標樣濃度范圍與抑制率有較好線性關系，標準曲線的回歸方程為I=0.2933 log c+0.8438（I為抑制率，c為農藥濃度，R2=0.9729），IC50為0.0674±0.004 mg/L，最低檢測限（IC10）為0.003±0.0001 mg/L，制備

5、的抗氰氟草酯抗體與其他結構類似的芳氧苯氧丙酸酯除草劑沒有交叉反應。
　　 以建立的兩種ELISA分析方法，對土壤和水做了添加回收率試驗，添加濃度為0.01mg/L（mg/kg）～5 mg/L（mg/kg），ic-ELISA法測定土壤中精噁唑禾草靈的添加回收率為81.82％～110.56％，變異系數(shù)為0.85％～3.16％，在田間灌溉水中的添加回收率為83.16％～98.06％之間，變異系數(shù)為0.97％～6.25％；氰氟草酯ic-