南坑3號楊快繁體系的建立及安徽省主栽楊樹品種遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、楊樹作為安徽省主要的短周期速生豐產(chǎn)工業(yè)用材林樹種，優(yōu)良無性系的選擇利用至關(guān)重要，在安徽省森林質(zhì)量提升行動計(jì)劃中，楊樹作為專項(xiàng)提升計(jì)劃正在開展。目前楊樹造林存在以下問題：一是良種繁育和種苗生產(chǎn)管理滯后，品種大量老化；二是引進(jìn)的新品種容易與本土品種混雜，出現(xiàn)同物異名、同名異物現(xiàn)象；三是經(jīng)營粗放，林分質(zhì)量不高，病蟲危害較重。安徽省淮北平原由于楊樹品種單一，病蟲害正逐年加劇，嚴(yán)重影響我省林業(yè)生產(chǎn)。
　　 本文以南抗3號楊樹葉片為材料，對

2、該品種在快速繁殖體系建立過程中生長調(diào)節(jié)激素的種類及濃度進(jìn)行了系統(tǒng)研究，獲得最佳的培養(yǎng)效果，初步建立了高效的葉片快繁體系；同時通過ISSR分子標(biāo)記方法，從DNA水平對安徽省主栽的17個品種和引進(jìn)的7個品種進(jìn)行遺傳多樣性分析，并根據(jù)特異性條帶建立分子檢索表，構(gòu)建聚類圖，獲得以下結(jié)果：
　　 (1)篩選出南抗3號楊葉片進(jìn)行消毒的方法：75％的酒精消毒8s，0.1％的升汞溶液消毒4min。
　　 (2)優(yōu)化了南抗3號楊葉片快繁體

3、系，篩選出各階段適宜的培養(yǎng)基。誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.1mg/L；叢生芽增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA1.2mg/L+NAA 0.3mg/L+KT0.1mg/L；生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.01mg/L。
　　 (3)選用改進(jìn)的CTAB法提取楊樹葉片基因組，電泳檢測和OD值測定表明：DNA質(zhì)量符合分子生物學(xué)的要求。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室建立的楊樹ISSR-PCR反

4、應(yīng)體系，篩選ISSR引物及各引物的最適退火溫度。
　　 (4)利用ISSR標(biāo)記技術(shù)對安徽省主栽的17個楊樹品種和7個引進(jìn)品種進(jìn)行遺傳多樣性分析，10條引物在17個楊樹品種中共擴(kuò)增出67條重復(fù)性高、穩(wěn)定性好的條帶，其中54條為多態(tài)性條帶，多態(tài)性比為80.6％；在24個楊樹品種中擴(kuò)增出72條重復(fù)性高、穩(wěn)定性好的條帶，其中56條為多態(tài)性條帶，多態(tài)性比為77.8％。
　　 (5)利用特殊譜帶分別建立安徽省主栽的17個楊樹品種和2

5、4個楊樹品種的分子檢索表。
　　 (6)根據(jù)擴(kuò)增片段，利用NTSYS-pc2.10e分析軟件計(jì)算樣品間的Jaccard遺傳相似性系數(shù)，并構(gòu)建聚類樹狀圖。在17個楊樹品種中，親緣關(guān)系最近的為南林95和南林895，遺傳系數(shù)為0.9620，遺傳距離為0.0387；親緣關(guān)系最遠(yuǎn)的為南抗3號和中渦1號，遺傳系數(shù)為0.3773，遺傳距離為0.9747。
　　 本實(shí)驗(yàn)建立了南抗3號楊葉片高效快繁體系，利用特殊譜帶建立了安徽省24個楊樹