中國(guó)水仙ACS基因克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究以中國(guó)水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)和轉(zhuǎn)ACS反義基因的中國(guó)水仙試管小鱗莖為試驗(yàn)材料,進(jìn)行如下研究:①葉片ACS基因同源克??;②愈傷組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化;③初代轉(zhuǎn)基因試管苗小鱗莖繼代增殖和移栽。主要研究結(jié)果如下:
   1、中國(guó)水仙葉片ACS基因的克隆
   采用申能博彩RNA試劑盒與TRIZOL試劑相結(jié)合的方法提取的總RNA,其完整性比較好、純度高、量也較大,能夠較好的去除

2、多糖多酚,是提取中國(guó)水仙葉片總RNA行之有效的方法。應(yīng)用同源克隆結(jié)合RACE技術(shù),獲得中國(guó)水仙葉片ACS的cDNA片段1427bp,包含3’端17個(gè)poly(A)尾。該序列與登入GenBank的其他植物ACS基因有較高的同源性,序列分析發(fā)現(xiàn)該片段包含一個(gè)最大為1200bp的閱讀框,編碼400個(gè)氨基酸,TAA為終止密碼子,已在GenBank上登錄,登錄號(hào)為GU182503。
   2、中國(guó)水仙愈傷組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究
  

3、 本試驗(yàn)以中國(guó)水仙鱗莖為供試材料,以鱗莖盤切塊為外植體誘導(dǎo)愈傷組織,對(duì)中國(guó)水仙愈傷組織的培養(yǎng)進(jìn)行研究,優(yōu)化其繼代增殖條件。在暗培養(yǎng)的條件下,采用對(duì)稱分布的方式接種在附加2,4-D1.0mg/L、KT0.1 mg/L、BA0.5mg/L、30g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上,最有利于中國(guó)水仙愈傷組織的培養(yǎng)。
   3、初代轉(zhuǎn)基因試管苗的繼代增殖和移栽
   研究結(jié)果表明:初代轉(zhuǎn)基因試管苗小鱗莖在附加6-BA2.0mg/L、2,4

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