ChM-I、VCAM-1基因在肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良差異表達的時序性研究.pdf

1、脛骨軟骨發(fā)育不良（Tibial Dyschondroplasia，TD）是肉雞常見的骨骼疾病之一，以骺板成熟面形成不能血管化也不能礦化的軟骨栓為特點。TD的發(fā)生與品種、日糧的Ca/P比和陰陽離子的比例等因素有關(guān)。TD的發(fā)生已對養(yǎng)雞業(yè)造成重大經(jīng)濟損失，近年來對TD病理過程的研究已有不少，但對其具體的發(fā)病機理仍然不甚明了。
　　 ChM-Ⅰ（chondromodulin-Ⅰ）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種軟骨源性因子，它能刺激軟骨細胞和成骨細胞

2、生長，抑制血管內(nèi)皮細胞的生長，這種基質(zhì)分子在軟骨無血管化過程中起到重要作用。VCAM-1（Vascular cell adhesion molecule1）是一種重要的粘附分子，它參與免疫細胞的粘附、遷移和造血細胞的生長發(fā)育，協(xié)助造血細胞粘附并定位于有利于其發(fā)育的微環(huán)境，參與造血細胞與基質(zhì)細胞形成聚集體，參與造血細胞的歸巢和遷移，因此VCAM-1在軟骨分化和血管化過程中起到重要作用。
　　 在本課題研究小組前期的試驗中，應(yīng)用抑制

3、消減雜交（SSH）技術(shù)篩選出10個差異表達基因，其中就包括ChM-Ⅰ和VCAM-1，但是二者在肉雞TD不同階段的差異表達情況尚不清楚，為此本研究采用realtime q-PCR、原位雜交和免疫組化方法分別從基因和蛋白水平對肉雞TD發(fā)生中ChM-Ⅰ和VCAM-1基因差異表達的時序性進行了研究，取得了結(jié)果如下：
　　 Realtime q-PCR和原位雜交發(fā)現(xiàn)肉雞患TD時，ChM-Ⅰ基因在不同時期出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)的現(xiàn)象。具體結(jié)果為飼料

4、中添加福美雙之后第1次和第4次采檢測ChM-Ⅰ基因表現(xiàn)為上調(diào)，第2次和第3次采樣檢測ChM-Ⅰ基因表現(xiàn)為下調(diào)；VCAM-1基因在1-4次采樣檢測都表現(xiàn)為下調(diào)；
　　 構(gòu)建了PKG-ChM-Ⅰ原核表達體系，成功表達ChM-Ⅰ基因，經(jīng)SDS-PAGE及Western blot分析表達產(chǎn)物的分子量約41kDa，以包涵體形式存在；用純化的ChM-Ⅰ表達蛋白作為抗原免疫新西蘭大耳兔，制備出兔抗ChM-Ⅰ多抗，并純化IgG；