ChM-I、VCAM-1基因在肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良差異表達(dá)的時(shí)序性研究.pdf

1、脛骨軟骨發(fā)育不良（Tibial Dyschondroplasia，TD）是肉雞常見的骨骼疾病之一，以骺板成熟面形成不能血管化也不能礦化的軟骨栓為特點(diǎn)。TD的發(fā)生與品種、日糧的Ca/P比和陰陽(yáng)離子的比例等因素有關(guān)。TD的發(fā)生已對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，近年來(lái)對(duì)TD病理過(guò)程的研究已有不少，但對(duì)其具體的發(fā)病機(jī)理仍然不甚明了。
　　 ChM-Ⅰ（chondromodulin-Ⅰ）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種軟骨源性因子，它能刺激軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞

2、生長(zhǎng)，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，這種基質(zhì)分子在軟骨無(wú)血管化過(guò)程中起到重要作用。VCAM-1（Vascular cell adhesion molecule1）是一種重要的粘附分子，它參與免疫細(xì)胞的粘附、遷移和造血細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育，協(xié)助造血細(xì)胞粘附并定位于有利于其發(fā)育的微環(huán)境，參與造血細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞形成聚集體，參與造血細(xì)胞的歸巢和遷移，因此VCAM-1在軟骨分化和血管化過(guò)程中起到重要作用。
　　 在本課題研究小組前期的試驗(yàn)中，應(yīng)用抑制

3、消減雜交（SSH）技術(shù)篩選出10個(gè)差異表達(dá)基因，其中就包括ChM-Ⅰ和VCAM-1，但是二者在肉雞TD不同階段的差異表達(dá)情況尚不清楚，為此本研究采用realtime q-PCR、原位雜交和免疫組化方法分別從基因和蛋白水平對(duì)肉雞TD發(fā)生中ChM-Ⅰ和VCAM-1基因差異表達(dá)的時(shí)序性進(jìn)行了研究，取得了結(jié)果如下：
　　 Realtime q-PCR和原位雜交發(fā)現(xiàn)肉雞患TD時(shí)，ChM-Ⅰ基因在不同時(shí)期出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)的現(xiàn)象。具體結(jié)果為飼料

4、中添加福美雙之后第1次和第4次采檢測(cè)ChM-Ⅰ基因表現(xiàn)為上調(diào)，第2次和第3次采樣檢測(cè)ChM-Ⅰ基因表現(xiàn)為下調(diào)；VCAM-1基因在1-4次采樣檢測(cè)都表現(xiàn)為下調(diào)；
　　 構(gòu)建了PKG-ChM-Ⅰ原核表達(dá)體系，成功表達(dá)ChM-Ⅰ基因，經(jīng)SDS-PAGE及Western blot分析表達(dá)產(chǎn)物的分子量約41kDa，以包涵體形式存在；用純化的ChM-Ⅰ表達(dá)蛋白作為抗原免疫新西蘭大耳兔，制備出兔抗ChM-Ⅰ多抗，并純化IgG；