食品毒理學(xué)·食品中化學(xué)毒物的一般毒性作用

1、第五章 食品中化學(xué)毒物的一般毒性作用,主要教學(xué)內(nèi)容：,急性、亞慢性、慢性毒性作用的概念；急性、亞慢性、慢性毒性試驗(yàn)的目的和 方法。,化學(xué)毒物： 指在一定條件下，以較小劑量給予時(shí)，可與生物體相互作用，引起生物體功能性或器質(zhì)性損害的化學(xué)物質(zhì)。一般毒性作用： 外來化學(xué)物在一定劑量、一定接觸時(shí)間和接觸方式下對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的綜合毒效應(yīng)。分類（根據(jù)接觸毒物的時(shí)間長短）： 急性毒性、亞慢性毒性和慢性毒性。,0 概述,第六章

2、化學(xué)毒物的一般毒性作用,一、急性毒性的概念二、急性毒性分級(jí)三、急性毒性試驗(yàn)的目的三、急性毒性試驗(yàn)的方法,第一節(jié) 急性毒性的作用,一、急性毒性的概念（acute toxicity）指機(jī)體（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人）一次或24h內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后，在短期內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)，包括一般行為和外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。,第一節(jié) 急性毒性作用,1、急性接觸的次數(shù)（一次或多次：經(jīng)口、經(jīng)注射；經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚染毒指一個(gè)特定期間內(nèi)）2、中毒

3、效應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間（一般為7-14d） 急性毒性效應(yīng)一般是指機(jī)體接觸化學(xué)物后，在較短時(shí)間內(nèi)觀察到的毒性癥狀。 3、中毒效應(yīng)的強(qiáng)度 與毒物性質(zhì)和染毒劑量大小有關(guān)。,急性毒性概念中的幾個(gè)問題,,二、急性毒性分級(jí),,二、急性毒性分級(jí),表5-3 我國農(nóng)藥的急性毒性分級(jí),二、急性毒性分級(jí),表2-1 化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分級(jí),1、測試和求出毒物的致死劑量，以及其他急性毒性參數(shù)，通常以LD50為最主要的參數(shù)。2、初步評(píng)估毒物對(duì)機(jī)體的毒效應(yīng)特

4、征、靶器官、劑量-反應(yīng)關(guān)系，以及對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性。3、為亞慢性、慢性毒性試驗(yàn)研究以及其他毒理試驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)選擇的依據(jù)。4、為毒理學(xué)機(jī)制研究提供線索。,三、急性毒性試驗(yàn)的目的,四、急性毒性試驗(yàn)的方法,（一）急性毒性參數(shù)1. 皮膚-皮下系數(shù)指化學(xué)物對(duì)同一種系試驗(yàn)動(dòng)物、相同年齡與性別條件下，經(jīng)皮膚LD50與皮下注射LD50的比值（皮膚LD50/皮下LD50）。 比值越接近1，化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收的危險(xiǎn)性越大。,四、

5、急性毒性試驗(yàn)的方法,2. 經(jīng)口-腹注系數(shù)化學(xué)物對(duì)同種系、同年齡、同性別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口LD50與腹注LD50的比值（ 經(jīng)口LD50/腹注LD50）。比值越接近1，化學(xué)物經(jīng)口吸收越完全。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法,3. 急性毒作用帶 指毒性上限（以LD50表示）與毒性下限（急性閾值）的比值，即 Zac=LD50/Limac Zac的數(shù)值大小反映急性閾劑量距離LD50的寬窄。 該值越

6、大，毒作用帶越寬，引起急性中毒死亡的危險(xiǎn)性越小。因閾值很難求出，采用累積死亡率的15.9%和84.1%來計(jì)算，即LD84/LD16代替之。,（二）急性毒性試驗(yàn)程序包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、染毒途徑、染毒劑量、觀察周期、觀察指標(biāo)的選擇、計(jì)算方法和評(píng)價(jià)等。一般來說，一個(gè)新化學(xué)物在研制初期就要進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。如果急性毒性試驗(yàn)通不過，則后面的所有試驗(yàn)都不必進(jìn)行了。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法,1.試驗(yàn)動(dòng)物 動(dòng)物種類：大鼠、小鼠、兔、狗等。選定

7、動(dòng)物后，首先進(jìn)行動(dòng)物檢疫，檢疫期一般1~2周，狗應(yīng)做腸道寄生蟲檢查或直接驅(qū)蟲治療。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體選擇通常要求剛成年的動(dòng)物，且為健康未曾交配和受孕的動(dòng)物。小動(dòng)物年齡與體重有關(guān)，故以體重來表示，體重變異范圍小于20%。大鼠180～240g、小鼠18～25g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～250g、狗10～15kg。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別

8、通常要求為雌雄各半。但如有資料或預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)化學(xué)物對(duì)雌、雄動(dòng)物毒效應(yīng)有明顯的性別差異，則應(yīng)單獨(dú)分別試驗(yàn)并求出雌、雄性動(dòng)物各自的LD50值。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（3）試驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量 根據(jù)組數(shù)和每組數(shù)量決定； 不同的LD50計(jì)算方法對(duì)組數(shù)要求不同，一般為4~6組； 大、小鼠等小動(dòng)物：每組數(shù)量10只，狗等大動(dòng)物為6只。,（4）給藥前禁食處理采用經(jīng)口途徑染毒，在試驗(yàn)給藥

9、前應(yīng)作禁食處理，減少食物的干擾。大鼠在前一天傍晚下班時(shí)或晚間將飼料撤掉。小鼠由于其消化吸收和代謝速度較快，可隔夜禁食，也可禁食4h以上。大動(dòng)物在染毒前不喂食，染毒后繼續(xù)禁食3~4h。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（5）隨機(jī)分組 依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原則（隨機(jī)分組表），進(jìn)行隨機(jī)分組； 目的：減少個(gè)體間差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾，提高每組試驗(yàn)動(dòng)物間的均衡性。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,2.染毒劑量選擇與劑量分

10、組 了解：化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、雜質(zhì)成分、理化性質(zhì)特別是揮發(fā)性、溶解性等。 確定LD50計(jì)算公式，再設(shè)計(jì)劑量分組。如寇氏法、Bliss法，一般設(shè)5～8個(gè)劑量組；霍恩氏法設(shè)4個(gè)劑量組。 計(jì)算試驗(yàn)所需受試物的總量，一次備齊全部實(shí)驗(yàn)的用量。 應(yīng)以同一批號(hào)為宜。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,一般推薦，染毒最大量：①經(jīng)口20ml/kg（對(duì)空腹動(dòng)物）；②經(jīng)皮2ml/kg（根據(jù)體表

11、面積計(jì)算，限于染毒的準(zhǔn)確性）；③靜脈1ml/kg（5min以上）；④肌內(nèi)注射0.5ml/kg（一個(gè)部位）；⑤鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。,以改良寇氏法經(jīng)口染毒為例：先查閱文獻(xiàn)，找出與受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)相似的化學(xué)物的毒性資料，取其與本試驗(yàn)動(dòng)物相同品系或物種經(jīng)口染毒的LD50值作為預(yù)試驗(yàn)的估計(jì)毒性中值；再以劑量差4倍（其對(duì)數(shù)值lg4=0.6）設(shè)計(jì)劑量組，形成3~5個(gè)劑量組。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,四、急

12、性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,若待測化學(xué)物缺乏相應(yīng)毒性資料，可參考其他途徑染毒資料；若資料全無，可以1mg/kg為最低劑量組（lg1=0）。若經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，待測化學(xué)物致死劑量范圍較窄，表5-5的劑量組間距可縮小至1.6倍，即lg1.6=0.2，則劑量范圍縮小為15.9~100.5mg/kg。當(dāng)預(yù)實(shí)驗(yàn)表明化學(xué)物毒性很大或很小時(shí)，最低組劑量可下調(diào)或上調(diào)，再依以上原則分組進(jìn)行再次預(yù)實(shí)驗(yàn)。,

13、四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,通過以上方法找出待測化學(xué)物的大致致死劑量范圍（從0~10%至90%~100%）后，就可設(shè)計(jì)正式劑量分組。改良寇氏法最后設(shè)立5個(gè)劑量組，小鼠每個(gè)劑量組10只，雌雄各半。按下式計(jì)算劑量分組：,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,若試驗(yàn)動(dòng)物給予高劑量5g/kg時(shí)，仍無明顯中毒癥狀，或雖中毒但沒死亡，此時(shí)可不再求其LD50，因此時(shí)表明化學(xué)物毒性不大。預(yù)試驗(yàn)也可先以5g/kg劑量為限度劑量進(jìn)行

14、試探，來決定是否需要正式求LD50。急性毒性試驗(yàn)除設(shè)立幾個(gè)劑量組外，是否設(shè)正常和溶劑對(duì)照組，根據(jù)需要確定。,3.試驗(yàn)期及中毒效應(yīng)觀察急性毒性試驗(yàn)一般是以死亡為主要記錄內(nèi)容。 除此之外還要注意： 中毒體征及發(fā)生過程； 死亡情況和時(shí)間分布； 體重 病理形態(tài)學(xué)變化。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（1）中毒體征及發(fā)生過程應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄動(dòng)物出現(xiàn)的中毒體征、發(fā)生時(shí)間和體征發(fā)展的經(jīng)過。 如活動(dòng)增加，

15、騷動(dòng)、跳躍、呼吸困難、皮膚顏色變化，或者閉目靜臥、四肢無力、步態(tài)蹣跚、口鼻青紫。B. 機(jī)體對(duì)毒物作用的反應(yīng)可以表現(xiàn)出各個(gè)系統(tǒng)的特征。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（2）死亡情況和時(shí)間分布 急性毒性試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡數(shù)是計(jì)算LD50值的依據(jù)，動(dòng)物死亡數(shù)量每增加或減少一只都會(huì)對(duì)LD50值產(chǎn)生明顯影響，因此應(yīng)認(rèn)真觀察和記錄。分析中毒死亡時(shí)間的分布規(guī)律，也可以提供重要信息。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（3

16、）體重實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重變化指標(biāo)，可以反映動(dòng)物中毒后綜合性整體變化，是一個(gè)比較客觀簡便的量化指標(biāo)。因此在觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中毒體征的同時(shí)，對(duì)存活動(dòng)物應(yīng)定期多次稱量動(dòng)物的體重變化，一般為每周1次或2次。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,（4）病理檢查 對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖，肉眼觀察大體病理變化，如臟器外觀、大小、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其他改變，如有改變須取材作組織病理學(xué)檢查。對(duì)存活動(dòng)物在觀察期結(jié)束時(shí)亦應(yīng)進(jìn)行解

17、剖檢查，必要時(shí)做組織病理學(xué)檢查。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,觀察時(shí)間和周期高劑量組動(dòng)物染毒后常在數(shù)分鐘或數(shù)十分鐘內(nèi)出現(xiàn)死亡，染毒以后應(yīng)即刻開始觀察動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和死亡情況。給藥當(dāng)天應(yīng)連續(xù)或多次觀察，以后可根據(jù)情況，每天2次或多次觀察直到試驗(yàn)周期結(jié)束。急性毒性試驗(yàn)觀察周期一般為7-14天。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,4. LD50的計(jì)算（平均法）也稱階梯

18、法、上-下法。不將試驗(yàn)動(dòng)物分組，先以一個(gè)劑量試驗(yàn)，若死亡，則以下一個(gè)較小劑量試探；若死亡，則繼續(xù)下一個(gè)較小劑量試探；若出現(xiàn)存活，則再以較大的上一個(gè)劑量試探，以此類推。適用：快速發(fā)生中毒反應(yīng)及死亡的化學(xué)物。特點(diǎn)：節(jié)省試驗(yàn)動(dòng)物，一般12~14只。,四、急性毒性試驗(yàn)的方法：急性毒性試驗(yàn)程序,求解LD50的公式：,LD50求解舉例（教材P73）,某化學(xué)物給小鼠經(jīng)口染毒，以10mg/kg劑量試探，預(yù)計(jì)使用4個(gè)劑量組，劑量組距為對(duì)數(shù)值0.

19、2（即1.58倍），設(shè)計(jì)使用12只小鼠。結(jié)果如下表：,計(jì)算過程,這里n=12，∵ ∑xf =(12.59*2)+(10.00*5)+(7.94*4)+(6.31*1) =113.25 (∑xf)2 = 12 825.56 ∑x2f = (12.592*2)+(10.002*5)+(7.942*4)+(6.312*1) = 1109 n∑x2f = 1

20、3 308∴ LD50= (∑xf) /n=113.25/12=9.44 mg/kg S=[D/n2*(n-1)]1/2=[(13308-12825.56)/(144*11)] ½ = 0.55即：此化學(xué)物小鼠經(jīng)口LD50=（9.44±0.55）mg/kg,1、經(jīng)口（胃腸道）染毒 灌胃 喂飼

21、 吞咽膠囊,三、染毒方法,2、經(jīng)呼吸道染毒研究生產(chǎn)條件下以氣體、蒸氣、粉塵、煙、霧等形式存在于車間空氣中的工業(yè)毒物，評(píng)價(jià)環(huán)境空氣污染物，以吸入為給藥途徑的藥物，常常采用經(jīng)呼吸道染毒的途徑。,三、染毒方法,3、經(jīng)皮膚染毒 經(jīng)皮膚染毒的方式：先使用化學(xué)法脫毛（常用脫毛劑為硫化鋇加滑石粉1：4或硫化鈉加淀粉1：4）或機(jī)械法脫毛（剪剃去毛），將動(dòng)物脊柱兩側(cè)背毛脫去，去毛面積常為體表面積的10％。局部涂敷受試物并以玻璃紙覆蓋固定一定時(shí)間

22、接觸染毒。,三、染毒方法,4、經(jīng)注射途徑染毒對(duì)注射藥品或需作比較毒性觀察的藥品進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)時(shí)，須作經(jīng)注射途徑染毒。注射途徑可分為靜脈注射或滴注、腹腔注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、椎管內(nèi)注射等。,三、染毒方法,一、蓄積作用的概念二、蓄積作用的研究方法,第二節(jié) 蓄積作用,第二節(jié) 蓄積作用,一、蓄積作用的基本概念外源化學(xué)物進(jìn)入機(jī)體后，經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化排出體外，或直接排出體外。但是當(dāng)其連續(xù)地、反復(fù)地進(jìn)入機(jī)體，而且吸收速度或總

23、量超過代謝轉(zhuǎn)化排出的速度或總量時(shí)，化學(xué)物質(zhì)就有可能在體內(nèi)逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)物質(zhì)的蓄積作用。,第二節(jié) 蓄積作用,二、蓄積作用的研究方法試驗(yàn)?zāi)康模呵蟪鐾庠椿瘜W(xué)毒物的蓄積系數(shù)，了解蓄積毒性的強(qiáng)弱，并為慢性毒性試驗(yàn)及其他有關(guān)毒性試驗(yàn)的劑量選擇提供參考。 常用研究方法： 蓄積系數(shù)法、生物半減期法。,第二節(jié) 蓄積作用：研究方法,（一）蓄積系數(shù)法是一種以生物效應(yīng)為指標(biāo)，用經(jīng)驗(yàn)系數(shù)（K）評(píng)價(jià)蓄積作用的方法，即將多次染毒與一

24、次染毒所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)（或死亡）進(jìn)行比較。蓄積系數(shù)：多次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)效應(yīng)（或死亡）的蓄積劑量［LD50（n)］與一次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)相同效應(yīng)（或死亡）的劑量[LD50（1）」的比值，即：,,第二節(jié) 蓄積作用：研究方法,K值越小，表示化學(xué)毒物的蓄積性越大。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)化學(xué)毒物發(fā)生過敏現(xiàn)象，則可能出現(xiàn)K<1。隨著化學(xué)毒物蓄積作用減弱，K值增加，通常認(rèn)為K≥5，其蓄積毒性極弱。,,1、固定劑量法測定蓄積系數(shù)法,實(shí)驗(yàn)動(dòng)

25、物:大、小鼠； 染毒途徑：多用經(jīng)口灌胃或腹腔注射。 具體步驟： 先求出某毒物的LD50，然后選取相同條件的40只（或更多）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為兩組，一為染毒試驗(yàn)組，一為對(duì)照組，每組至少20只，雌雄各半。 在1/20～1/5 LD50的范圍內(nèi)選定一個(gè)劑量，每日以固定劑量，定時(shí)和相同途徑對(duì)試驗(yàn)組進(jìn)行染毒，觀察記錄動(dòng)物死亡數(shù)。,1、固定劑量法測定蓄積系數(shù)法,當(dāng)試驗(yàn)組累積發(fā)生一半動(dòng)物死亡即可終止試驗(yàn)。 此時(shí)，計(jì)算累積總接觸劑量，根據(jù)公

26、式計(jì)算K值，然后依上表進(jìn)行評(píng)價(jià)。若接觸劑量已累積達(dá)到5個(gè)LD50劑量，也可終止試驗(yàn)，此時(shí)計(jì)算出K＞5。 固定劑量法試驗(yàn)期為25～100天。,2、定期遞增劑量法,試驗(yàn)方案同上，以4天為一期，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)按0.1LD50劑量給予試驗(yàn)組染毒，每期增加1.5倍。第一個(gè)四天按0.1LD50×4天第二個(gè)四天按0.15LD50×4天第三個(gè)四天按0.22LD50×4天……依次類推。這一方案試驗(yàn)期最長28天。,

27、,2、定期遞增劑量法,在試驗(yàn)期間，當(dāng)化學(xué)毒物引起動(dòng)物累積死亡一半時(shí)即可終止試驗(yàn)，計(jì)算K值進(jìn)行評(píng)價(jià)。一般來說，在試驗(yàn)第21天也可結(jié)束試驗(yàn)，因?yàn)檫@之前如果動(dòng)物沒有死亡或死亡數(shù)不足一半，說明其累積量已達(dá)5.26LD50，即K＞5。本方法劑量設(shè)計(jì)方案見表6-6。,,二、蓄積作用：研究方法,（二）生物半減期法（t1/2） 是用毒物動(dòng)力學(xué)原理描述化學(xué)毒物在機(jī)體內(nèi)的蓄積作用。 化學(xué)毒物在體內(nèi)蓄積的速度和量與機(jī)體單位時(shí)間內(nèi)吸收該物質(zhì)的速度以及清

28、除速度有關(guān)。,,（二）生物半減期法,tl/2較短的化學(xué)物達(dá)到蓄積極限所需的時(shí)間也短，t1/2長者達(dá)到蓄積極限的時(shí)間也長。,,（二）生物半減期法,一種化學(xué)毒物若以tl/2相等的時(shí)間間距染毒，其在體內(nèi)經(jīng)過6個(gè)t1/2的接觸期就可以基本上達(dá)到蓄積的極限，此時(shí)理論蓄積量達(dá)到極限的98.4％。此后即使繼續(xù)接觸該物質(zhì)，機(jī)體內(nèi)的蓄積量基本上也不會(huì)增加。,,一、亞慢性毒性二、慢性毒性作用,第三節(jié) 亞慢性、慢性毒性作用,一、亞慢性毒性作用,(一)亞

29、慢性毒性的概念 指人或試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)接觸較長時(shí)間、較大劑量的外源化學(xué)物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。 接觸時(shí)間：介于單次染毒和動(dòng)物壽命的范圍。 較大劑量：大于慢性染毒的低劑量，小于急性毒性劑量。,（二）亞慢性毒性試驗(yàn)的目的1、研究受試物亞慢性毒性劑量-反應(yīng)（效應(yīng)），確定（NOAEL)和（LOAEL)，提出安全限量參考值。2、觀察受試物亞慢性毒性效應(yīng)譜、毒作用特點(diǎn)和毒作用靶器官。3、觀察受試物亞慢性毒性作用的可逆性。4、為慢性試驗(yàn)的

30、劑量設(shè)計(jì)和觀察指標(biāo)選擇提供依據(jù)。5、為在其他試驗(yàn)（急、亞急、其他動(dòng)物物種的亞慢性試驗(yàn)等）中發(fā)現(xiàn)的或未發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息。,二、亞慢性毒性作用：試驗(yàn)?zāi)康?1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇（l）物種和品系物種：嚙齒類(大鼠、家兔)，非嚙齒類(狗、猴)。 大鼠：常用Wistar和Sprague-Dawley。 犬：多使用Beagle犬。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),（2）性別、年齡和動(dòng)物數(shù) 性別：一般每組雌雄各半； 年齡：大鼠6～8周齡

31、（體重80～100g） 動(dòng)物數(shù)：大鼠、小鼠每組不少于20只； 犬、猴每組不少于6只。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),（3）微生物學(xué)寄生蟲學(xué)等級(jí)和飼養(yǎng)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分四級(jí)：普通級(jí)、清潔級(jí)、無特定病原體級(jí)（SPF級(jí)）、無菌級(jí)。犬和猴分為普通級(jí)和SPF兩級(jí)。亞慢性毒性試驗(yàn)，應(yīng)使用清潔級(jí)及以上等級(jí)大小鼠，并飼養(yǎng)在屏障環(huán)境內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),2、染毒途徑和染毒期限要求： 盡量選擇和人類接觸途徑相似的方式； 與預(yù)期進(jìn)

32、行的慢性毒作用研究的接觸途徑相一致。途徑：以經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮染毒為多。 染毒頻率：每日一次，連續(xù)給予，如試驗(yàn)期為3個(gè)月或超過3個(gè)月時(shí)，也可每周6次。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),3、劑量分組和劑量設(shè)計(jì) 一般至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組和1個(gè)陰性（溶劑）對(duì)照組。高劑量組應(yīng)能引起明顯的毒性或少量動(dòng)物的死亡（少于10%）。低劑量組應(yīng)無中毒反應(yīng)，相當(dāng)于未觀察到有害作用劑量（NOAEL）。高低劑量組間設(shè)置1個(gè)中劑量組，比較理想的中劑量組約相當(dāng)于觀

33、察到有害作用的最低劑量（LOAEL）。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),高劑量：采用急性毒性的閾劑量，或1/5～1/20的LD50劑量。 高、中、低劑量組距以3～5倍為宜，一般不少于2倍。,（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),4、觀察指標(biāo) 包括：一般性指標(biāo)和特異性指標(biāo)。 一般性指標(biāo)： 指非特異性指標(biāo)，能綜合反應(yīng)化學(xué)物對(duì)機(jī)體的毒 性反應(yīng)。 如動(dòng)物體重、食物利用率、中毒癥狀、血液學(xué)和 生化檢查、臟器系數(shù)和病理學(xué)檢查。,（三）亞

34、慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),（三）亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),特異性指標(biāo)： 指反映化學(xué)物對(duì)機(jī)體毒性作用本質(zhì)的指標(biāo)，利 于取得中毒機(jī)制的線索。 如：化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、急性或亞急性毒作用 的特征。,（四）亞慢性毒作用評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)指標(biāo)：亞慢性最大無作用劑量（NOAEL）、觀察到損害作用的最低劑量（LOAEL）。,二、慢性毒性作用,（一）慢性毒性的概念（chronic toxicity） 指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人長期（甚至終生）反復(fù)接觸外源化學(xué)物所

35、產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。 所謂“長期”，一般是指2年。 對(duì)大鼠相當(dāng)于終生染毒，對(duì)兔相當(dāng)于生命期的36%，對(duì)犬為20%，對(duì)猴為13％。,1、確定慢性毒性參數(shù)：如 LOAEL、NOAEL。2、闡明化學(xué)物毒性作用的性質(zhì)、靶器官和中毒 機(jī)制。3、為制定該化學(xué)物的人類接觸的安全限量標(biāo)準(zhǔn) 及進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)提供毒理學(xué)依據(jù)。,（二）慢性毒性試驗(yàn)的目的,（三）慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 大多用大鼠、犬和猴，經(jīng)皮染毒也可使用豚

36、鼠和家兔。動(dòng)物數(shù)量要明顯多于亞慢性試驗(yàn)，每組大鼠40～60只，犬8～10只，雌雄各半。嚙齒類動(dòng)物數(shù)不少于10只，非嚙齒類不少于4只。,（三）慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),2、染毒途徑和期限途徑：與亞慢性相同。研究工業(yè)毒物一般認(rèn)為染毒6個(gè)月或更長時(shí)間，環(huán)境毒物與食品的慢性毒性試驗(yàn)染毒期則要求1年以上或2年。也有學(xué)者主張動(dòng)物終生染毒。,（三）慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),3、劑量設(shè)計(jì)與分組 分組：一般設(shè)3個(gè)染毒劑量組和1個(gè)對(duì)照組，

37、 必要時(shí)另設(shè)1個(gè)溶劑對(duì)照組。 劑量： 高劑量：應(yīng)有輕微可見的毒性反應(yīng)或某項(xiàng)指 標(biāo)出現(xiàn)明顯而輕微的改變。 最低劑量：閾劑量或無作用劑量。,（三）慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì),4、觀察指標(biāo) 與亞慢性指標(biāo)基本相同。 以亞慢性毒性試驗(yàn)所提供的毒效應(yīng)和靶器官為基礎(chǔ)，重點(diǎn)觀察在亞慢性毒性試驗(yàn)中已經(jīng)顯現(xiàn)的陽性指標(biāo)。 優(yōu)先采用亞慢性毒性試驗(yàn)篩選出來的敏感指標(biāo)或特異性指標(biāo)。,（四）慢性毒性作用評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)指標(biāo)： 慢性毒性NOAE