淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測(cè)項(xiàng)目介紹

1、封面一（深色底）本案主題標(biāo)題文字為28號(hào)方正蘭亭粗黑簡(jiǎn)體你的部門(mén)名稱(chēng)或本案引導(dǎo)標(biāo)題2012年9月12日,淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測(cè)項(xiàng)目介紹艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心 實(shí)驗(yàn)室 孫曉柏,血液腫瘤分類(lèi)進(jìn)程,,MICMFAB形態(tài)學(xué)診斷(Morphology)免疫學(xué)檢查(Immunology )細(xì)胞遺傳學(xué)檢查(Cytogenetics)分子遺傳學(xué)檢查(Molecular)WHY?主觀影響方法學(xué)限制,檢測(cè)方法,形

2、態(tài)學(xué):細(xì)胞學(xué)：外周血、骨髓涂片，淋巴結(jié)穿刺組織學(xué)：骨髓活檢、淋巴結(jié)活檢、血凝塊免疫學(xué)：流式細(xì)胞術(shù)（FCM）免疫組織化學(xué)細(xì)胞遺傳學(xué)： 核型分析（染色體異常）、熒光原位雜交（FISH）分子遺傳學(xué)： 融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突變（DNA測(cè)序）,形態(tài)學(xué),骨髓涂片看細(xì)胞、骨髓活檢看結(jié)構(gòu)，二者相互補(bǔ)充相互驗(yàn)證不能相互替代。,長(zhǎng)度 ≥ 1.5cm，血凝塊,免疫固定電泳免疫固定電泳對(duì)多發(fā)性骨髓瘤

3、、Waldenstrom巨球蛋白血癥、分泌型骨髓瘤、輕鏈病、重鏈病等研究有重大意義。常規(guī)檢測(cè)免疫球蛋白中常見(jiàn)的IgG,IgA,IgM,κ,λ,IgD和IgE概率極低，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)單獨(dú)輕鏈，不能排除是IgE和IgD結(jié)合輕鏈的可能，若需要確定是否為游離輕鏈，將進(jìn)一步檢測(cè)。多發(fā)性骨髓瘤患者在治療后易出現(xiàn)輕鏈丟失，電泳圖譜與重鏈病圖譜相似，此類(lèi)患者建議加做尿液的免疫固定電泳檢測(cè)是否存在游離輕鏈，以作進(jìn)一步區(qū)分。,遺傳學(xué),,分子生物學(xué),

4、融合基因篩查,適用患者 本篩查項(xiàng)目主要用于篩查ALL、AML、CML、AMMOL、CMML、MDS等血液病病種可能出現(xiàn)的31種融合基因或癌基因，及其融合基因的110余種剪切變異情況。適合無(wú)法確定融合基因類(lèi)別的初診患者，便于醫(yī)生對(duì)血液病患者進(jìn)行分子標(biāo)志物的確定，并進(jìn)行后續(xù)微小殘留病灶的監(jiān)控。 本項(xiàng)目建議配合染色體核型分析一起檢測(cè)，以免由于染色體數(shù)目異常或攜帶少見(jiàn)融合基因而造成漏診。,不同疾病篩查項(xiàng)目,ALL融

5、合基因篩查（18種）AML融合基因篩查（23種）APL融合基因篩查（3種）MLL融合基因篩查（11種）,APL的5種融合基因亞型,Chromosomal t (15;17) t (11;17) t (11;17) t (5;17) dup (17) aberration (q22;q21) (q23;q21)(q13;q21)(q3

6、5;q21) (q21.3q23)Frequency >95% 1~2% rare rarerareFusion gene PML-RARa PLZF-RARa NuMA-RARa NPM-RARaSTAT5b-RARa 100% 100% yes

7、 yes yes RARa-PML RARa-PLZF RARa-NuMA RARa-NPM RARa-STAT5b 60~70% 100%no yes noNuclear in 100 micro speckles localized

8、 in microspeckle sheet likemicrospecklelocalization which maybe microspeckles pattern aggregation pattern, maybe localized in be loca

9、lized cytoplasm in cytoplasmResponse toATRA good no, may respond goodyes no to ATRA+G

10、-CSFChemo good no, may respond to chemo/ATRAArsenic good, with no PLZF-RARa not known not known not known

11、 degradation of degradation PML-RARa,,,CML的三種融合基因亞型,BCR-ABL, a model of activation of protein tyrosine kinase (PTK) in leukemo-genesis: growth and surv

12、ival advantages,突變檢測(cè)項(xiàng)目,WHO 2008 新界定的突變,技術(shù)交叉,TCR和IgH重排項(xiàng)目有5-10%的患者無(wú)法通過(guò)常規(guī)方法辨別其淋巴系統(tǒng)的增生是惡性增生還是反應(yīng)性增生。 正常淋巴細(xì)胞在成熟過(guò)程中重排是多克隆性的，但惡性腫瘤（＞98%）表現(xiàn)為單克隆性Ig和/或TCR基因重排。適用患者及適應(yīng)癥：疑似淋巴瘤患者的良惡性鑒別診斷。淋系白血病患者的鑒別診斷及微小殘留跟蹤檢測(cè)。,免疫學(xué),流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用目的,確定髓系和淋

13、巴系別，及細(xì)胞分化階段；鑒別反應(yīng)性與克隆性淋巴細(xì)胞增生性疾??；確定髓系白血病各亞型（M0，M3，M6，M7）；對(duì)形態(tài)學(xué)分類(lèi)不明/比例低的細(xì)胞進(jìn)行定性（淋巴瘤-凝 血功能障礙或甲減等）；診斷急性混合細(xì)胞白血?。ù_診）；診斷微小殘留白血病或白血病浸潤(rùn)；輔助MPD/MDS診斷；判斷白血病/淋巴瘤預(yù)后，指導(dǎo)治療。,微小殘留病變檢測(cè),抗體選擇白血病/淋巴瘤免疫表型檢測(cè)（30CD）白血病/淋巴瘤免疫表型檢測(cè)（20

14、CD） 對(duì)于無(wú)法診斷或是臨床傾向不明的患者，確定細(xì)胞系別來(lái)源及分化程度，輔助分型，提供診斷以及治療依據(jù)。微小殘留病灶檢測(cè)（6CD） 有初診資料并且觀察到微小殘留跟蹤標(biāo)記微小殘留病灶檢測(cè)（20CD） 無(wú)初診資料或病情有復(fù)發(fā)情況MDS免疫表型檢測(cè)（20CD）多發(fā)性骨髓瘤免疫表型檢測(cè)（14CD）,,,,MICM整合報(bào)告,,Pig-a基因的克隆性干細(xì)胞突變Glycosylphosphatidylinosi

15、tol anchor，GPI缺失部分缺失：Ⅱ型細(xì)胞全部缺失：Ⅲ型細(xì)胞,PNH克隆檢測(cè),,檢測(cè)哪些細(xì)胞？紅細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 血小板,FLAER氣單胞菌溶素（aerolysin）直接連接于GPI錨蛋白，GPI陰性的PNH細(xì)胞對(duì)aerolysin出現(xiàn)抵抗。利用這一特性，制備出了采用熒光素（如ALEXA-488）標(biāo)記aerolysin的變異體（FLARE），通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或激光共聚焦等方法分析GPI陽(yáng)

16、性或陰性細(xì)胞。,Michael J. Borowitz et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by ?ow cytometry. Cytometry Part B 2010; 78B: 211–230.,,血液病質(zhì)量體系建設(shè),與UCLA（加利福尼亞大學(xué)）