TGF-β1對(duì)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞TGF-β受體及相關(guān)Smads表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)是一組以多肽形式存在的細(xì)胞因子。目前，已發(fā)現(xiàn)5種TGF-β亞型，在哺乳類動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)有TGF-β1、TGF-β2和HTGF-β3等三種亞型，其中TGF-β1是在人體中發(fā)現(xiàn)最多和研究最集中的一種亞型。TGF-β對(duì)不同類型細(xì)胞可表現(xiàn)為抑制或促增殖作用。TGF-β受體(TGF-βRs)和Smads是TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要組成部分。Smad家族可

2、分為受體活化Smads如Smad2和Smad3、共有Smad--Smad4和抑制性Smad如Smad7三類。TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在維持表皮內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、參與上皮組織腫瘤形成等方面具有重要作用。 本課題組的前期研究已發(fā)現(xiàn)，人類皮膚鱗癌組織原位存在著TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中TGF-βRs及幾種重要Smads表達(dá)水平的變化。然而，尚不清楚這些變化特點(diǎn)是僅存在于鱗癌的在體腫瘤形成過(guò)程中，抑或是鱗癌細(xì)胞所固有的TGF-

3、β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變。此外，體外培養(yǎng)人皮膚鱗癌細(xì)胞是否具有或仍保持著TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的某些異常及其對(duì)TGF-β1作用的反應(yīng)性有何改變?這些問(wèn)題均值得進(jìn)一步探討。 目的：研究體外培養(yǎng)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞TGF-β受體及相關(guān)Smads的表達(dá)情況，觀察外源性TGF-β1對(duì)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞TGF-β受體及相關(guān)Smads表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響，旨在加深對(duì)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑障礙與鱗癌細(xì)胞失控性增殖之關(guān)系的理解，為皮

4、膚鱗癌實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄(RT)-實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)(Realtime-PCR)和WesternBloting方法，分別檢測(cè)了人皮膚鱗癌A431細(xì)胞系與對(duì)照組人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞系TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、R-Smad和Co-SmadmRNA及其蛋白質(zhì)的表達(dá)。應(yīng)用RT-realtimePCR和MTT方法分別檢測(cè)了TGF-β1作用后，兩類細(xì)胞中TGF-BRⅠ、TGF-βRⅡ、

5、R-Smad(Smad2和Smad3)、Co-Smad(Smad4)以及Ⅰ-Smad(Smad7)mRNA表達(dá)水平的變化及細(xì)胞增殖特性。 結(jié)果：RT-RealtimePCR和WesternBloting研究顯示，與對(duì)照組HaCaT細(xì)胞相比，A431細(xì)胞中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3和Smad4mRNA和蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)。MTT分析顯示，隨著TGF-β1濃度升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)，HaCaT細(xì)胞的增殖抑制逐

6、漸明顯，而TGF-β1對(duì)A431細(xì)胞的抑制作用卻并不明顯。RT-realtimePCR結(jié)果顯示，經(jīng)TGF-β1作用后，A431細(xì)胞及對(duì)照組細(xì)胞隨TGF-β1濃度的升高而其TGF-βRⅠ/RⅡ、Smad2、Smad3和Smad4mRNA表達(dá)均逐漸下調(diào)，Smad7mRNA表達(dá)卻逐漸上調(diào)，但與對(duì)照組細(xì)胞相比，A431細(xì)胞的上述變化更為明顯。TGF-β1作用不同時(shí)間后上述分子表達(dá)的變化情況與前述變化類似。 結(jié)論：皮膚鱗癌A431細(xì)胞存在