TGF-β1對人皮膚鱗癌A431細胞TGF-β受體及相關Smads表達和細胞增殖的影響.pdf

1、背景：轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)是一組以多肽形式存在的細胞因子。目前，已發(fā)現(xiàn)5種TGF-β亞型，在哺乳類動物中發(fā)現(xiàn)有TGF-β1、TGF-β2和HTGF-β3等三種亞型，其中TGF-β1是在人體中發(fā)現(xiàn)最多和研究最集中的一種亞型。TGF-β對不同類型細胞可表現(xiàn)為抑制或促增殖作用。TGF-β受體(TGF-βRs)和Smads是TGFβ/Smad信號轉(zhuǎn)導途徑的重要組成部分。Smad家族可

2、分為受體活化Smads如Smad2和Smad3、共有Smad--Smad4和抑制性Smad如Smad7三類。TGF-β/Smad信號轉(zhuǎn)導途徑在維持表皮內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、參與上皮組織腫瘤形成等方面具有重要作用。 本課題組的前期研究已發(fā)現(xiàn)，人類皮膚鱗癌組織原位存在著TGF-β/Smad信號轉(zhuǎn)導通路中TGF-βRs及幾種重要Smads表達水平的變化。然而，尚不清楚這些變化特點是僅存在于鱗癌的在體腫瘤形成過程中，抑或是鱗癌細胞所固有的TGF-

3、β信號轉(zhuǎn)導通路的改變。此外，體外培養(yǎng)人皮膚鱗癌細胞是否具有或仍保持著TGF-β/Smad信號轉(zhuǎn)導途徑的某些異常及其對TGF-β1作用的反應性有何改變?這些問題均值得進一步探討。 目的：研究體外培養(yǎng)人皮膚鱗癌A431細胞TGF-β受體及相關Smads的表達情況，觀察外源性TGF-β1對人皮膚鱗癌A431細胞TGF-β受體及相關Smads表達和細胞增殖的影響，旨在加深對TGF-β信號轉(zhuǎn)導途徑障礙與鱗癌細胞失控性增殖之關系的理解，為皮

4、膚鱗癌實驗細胞學研究提供理論和實驗依據(jù)。 方法：應用反轉(zhuǎn)錄(RT)-實時定量多聚酶鏈反應(Realtime-PCR)和WesternBloting方法，分別檢測了人皮膚鱗癌A431細胞系與對照組人永生化角質(zhì)形成細胞HaCaT細胞系TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、R-Smad和Co-SmadmRNA及其蛋白質(zhì)的表達。應用RT-realtimePCR和MTT方法分別檢測了TGF-β1作用后，兩類細胞中TGF-BRⅠ、TGF-βRⅡ、

5、R-Smad(Smad2和Smad3)、Co-Smad(Smad4)以及Ⅰ-Smad(Smad7)mRNA表達水平的變化及細胞增殖特性。 結(jié)果：RT-RealtimePCR和WesternBloting研究顯示，與對照組HaCaT細胞相比，A431細胞中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3和Smad4mRNA和蛋白表達均顯著下調(diào)。MTT分析顯示，隨著TGF-β1濃度升高和作用時間延長，HaCaT細胞的增殖抑制逐

6、漸明顯，而TGF-β1對A431細胞的抑制作用卻并不明顯。RT-realtimePCR結(jié)果顯示，經(jīng)TGF-β1作用后，A431細胞及對照組細胞隨TGF-β1濃度的升高而其TGF-βRⅠ/RⅡ、Smad2、Smad3和Smad4mRNA表達均逐漸下調(diào)，Smad7mRNA表達卻逐漸上調(diào)，但與對照組細胞相比，A431細胞的上述變化更為明顯。TGF-β1作用不同時間后上述分子表達的變化情況與前述變化類似。 結(jié)論：皮膚鱗癌A431細胞存在