利用dna分子指紋圖譜技術(shù)檢測小麥粉中害蟲的研究

1、國家公益行業(yè)專項(xiàng)20151300205收稿日期20180126作者簡介：魯玉杰女1971年9月出生教授糧食儲藏與品質(zhì)控制利用DNA分子指紋圖譜技術(shù)檢測小麥粉中害蟲的研究魯玉杰袁園劉鳳杰王爭艷何向楠（河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院，河南省小麥儲藏協(xié)同創(chuàng)新中心，鄭州，450001）摘要摘要為開發(fā)快速檢測我國成品糧中害蟲的技術(shù)，研究了DNA分子指紋圖譜技術(shù)檢測小麥粉中主要害蟲的碎片和蟲卵的含量。結(jié)果表明，通過對害蟲的延長因子EF1基因片段引物的篩選

2、和PCR條件的選擇，確定了有效地檢測出來小麥粉中的赤擬谷盜、雜擬谷盜和鋸谷盜的成蟲碎片、幼蟲和卵通用引物和PCR擴(kuò)增條件。通過改良的PCR技術(shù)可在4h內(nèi)快速檢測雜擬谷盜、鋸谷盜的卵、幼蟲和成蟲碎片。最低檢出限為可檢測出小麥粉中0.05%（ww）卵和幼蟲、1%成蟲的碎片，靈敏度超過了國際標(biāo)準(zhǔn)。DNA指紋圖譜中電泳條帶亮度（Y）與被檢測的不同害蟲碎片含量（X）成正相關(guān)，回歸方程為Y=858.36X74.540相關(guān)系數(shù)r為0.9619。利用該

3、技術(shù)檢測隨機(jī)取樣的小麥粉中成蟲的碎片，檢測的準(zhǔn)確率最高可達(dá)80.56%。結(jié)果說明了利用DNA分子指紋圖譜技術(shù)可快速檢測出小麥粉中害蟲的碎片、幼蟲和卵含量，并可預(yù)測小麥粉中害蟲的感染程度。本研究為開發(fā)快速小麥粉中害蟲的快速檢測技術(shù)具有重要的參考意義。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞DNA分子指紋圖譜害蟲碎片赤擬谷盜雜擬谷盜小麥粉最低檢測限中圖分類號：號：TS201.6Q969.98文獻(xiàn)文獻(xiàn)標(biāo)識碼標(biāo)識碼：A文章文章編號：號：10030174（）DNAMolec

4、ularFingerprintPatternTechnologytoDetectPestsinWheatFlourLuYujieYuanYuanFengjieLiuZhengyanWangXiangnanHe(SchoolofFoodScienceTechnology，HenanUniversityofTechnologyZhengzhouHenanProvince450001)3片，其靈敏度為小麥粉中1.0%的害蟲感染水平。本文為開發(fā)

5、小麥粉中快速有效的檢測害蟲的技術(shù)，利用了昆蟲的延長因子基因EF1為目的基因的DNA分子指紋圖譜技術(shù)對小麥粉中的常見的赤擬谷盜Triboliumcastaneum、雜擬谷盜Triboliumconfusum和鋸谷盜yzaephilussurinamensis的碎片、幼蟲和卵進(jìn)行了檢測，并抽取了面粉廠中樣品對其幼蟲含量進(jìn)行了靈敏度和準(zhǔn)確率的驗(yàn)證。1.材料與方法材料與方法1.1供試材料供試材料1.1.1蟲源蟲源試蟲赤擬谷盜Triboliumc

6、astaneum，雜擬谷盜Triboliumconfusum和鋸谷盜yzaephilussurinamensis采自河南省鄭州市，在河南工業(yè)大學(xué)儲糧生態(tài)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)數(shù)代后備用。選用蟲齡、生理狀態(tài)一致的赤擬谷盜、雜擬谷盜、鋸谷盜（成蟲、幼蟲和蟲卵）。赤擬谷盜和雜擬谷盜的飼料為全麥粉：碎麥粒：酵母（9:3:1）；鋸谷盜的飼料配比為：全麥粉：碎麥粒：燕麥片：酵母（5:3:3:1）。在溫度（302）℃，濕度（705）%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.1.2供

7、試小麥粉供試小麥粉選用無蟲且品質(zhì)較好的小麥，將其除去雜質(zhì)后用自來水洗干凈，放入烘箱中60℃烘（2~3）h，烘干，將小麥的水分含量調(diào)至（140.5）%。將小麥取出冷卻至室溫，用實(shí)驗(yàn)室小麥磨粉機(jī)磨成小麥粉。小麥粉經(jīng)過80目篩子，篩去大于80目篩孔的小麥粉或面團(tuán)，篩下物即為所需的小麥粉樣品。一部分小麥粉用于所需蟲源的飼料，一部分作為DNA提取時所需的小麥粉樣品。1.2方法方法1.2.1兼并引物設(shè)計(jì)兼并引物設(shè)計(jì)以鞘翅目模式昆蟲赤擬谷盜的延長因子