利用dna分子指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)小麥粉中害蟲的研究

1、國(guó)家公益行業(yè)專項(xiàng)20151300205收稿日期20180126作者簡(jiǎn)介：魯玉杰女1971年9月出生教授糧食儲(chǔ)藏與品質(zhì)控制利用DNA分子指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)小麥粉中害蟲的研究魯玉杰袁園劉鳳杰王爭(zhēng)艷何向楠（河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院，河南省小麥儲(chǔ)藏協(xié)同創(chuàng)新中心，鄭州，450001）摘要摘要為開發(fā)快速檢測(cè)我國(guó)成品糧中害蟲的技術(shù)，研究了DNA分子指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)小麥粉中主要害蟲的碎片和蟲卵的含量。結(jié)果表明，通過對(duì)害蟲的延長(zhǎng)因子EF1基因片段引物的篩選

2、和PCR條件的選擇，確定了有效地檢測(cè)出來小麥粉中的赤擬谷盜、雜擬谷盜和鋸谷盜的成蟲碎片、幼蟲和卵通用引物和PCR擴(kuò)增條件。通過改良的PCR技術(shù)可在4h內(nèi)快速檢測(cè)雜擬谷盜、鋸谷盜的卵、幼蟲和成蟲碎片。最低檢出限為可檢測(cè)出小麥粉中0.05%（ww）卵和幼蟲、1%成蟲的碎片，靈敏度超過了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。DNA指紋圖譜中電泳條帶亮度（Y）與被檢測(cè)的不同害蟲碎片含量（X）成正相關(guān)，回歸方程為Y=858.36X74.540相關(guān)系數(shù)r為0.9619。利用該

3、技術(shù)檢測(cè)隨機(jī)取樣的小麥粉中成蟲的碎片，檢測(cè)的準(zhǔn)確率最高可達(dá)80.56%。結(jié)果說明了利用DNA分子指紋圖譜技術(shù)可快速檢測(cè)出小麥粉中害蟲的碎片、幼蟲和卵含量，并可預(yù)測(cè)小麥粉中害蟲的感染程度。本研究為開發(fā)快速小麥粉中害蟲的快速檢測(cè)技術(shù)具有重要的參考意義。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞DNA分子指紋圖譜害蟲碎片赤擬谷盜雜擬谷盜小麥粉最低檢測(cè)限中圖分類號(hào)：號(hào)：TS201.6Q969.98文獻(xiàn)文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼標(biāo)識(shí)碼：A文章文章編號(hào)：號(hào)：10030174（）DNAMolec

4、ularFingerprintPatternTechnologytoDetectPestsinWheatFlourLuYujieYuanYuanFengjieLiuZhengyanWangXiangnanHe(SchoolofFoodScienceTechnology，HenanUniversityofTechnologyZhengzhouHenanProvince450001)3片，其靈敏度為小麥粉中1.0%的害蟲感染水平。本文為開發(fā)

5、小麥粉中快速有效的檢測(cè)害蟲的技術(shù)，利用了昆蟲的延長(zhǎng)因子基因EF1為目的基因的DNA分子指紋圖譜技術(shù)對(duì)小麥粉中的常見的赤擬谷盜Triboliumcastaneum、雜擬谷盜Triboliumconfusum和鋸谷盜yzaephilussurinamensis的碎片、幼蟲和卵進(jìn)行了檢測(cè)，并抽取了面粉廠中樣品對(duì)其幼蟲含量進(jìn)行了靈敏度和準(zhǔn)確率的驗(yàn)證。1.材料與方法材料與方法1.1供試材料供試材料1.1.1蟲源蟲源試蟲赤擬谷盜Triboliumc

6、astaneum，雜擬谷盜Triboliumconfusum和鋸谷盜yzaephilussurinamensis采自河南省鄭州市，在河南工業(yè)大學(xué)儲(chǔ)糧生態(tài)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)數(shù)代后備用。選用蟲齡、生理狀態(tài)一致的赤擬谷盜、雜擬谷盜、鋸谷盜（成蟲、幼蟲和蟲卵）。赤擬谷盜和雜擬谷盜的飼料為全麥粉：碎麥粒：酵母（9:3:1）；鋸谷盜的飼料配比為：全麥粉：碎麥粒：燕麥片：酵母（5:3:3:1）。在溫度（302）℃，濕度（705）%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.1.2供

7、試小麥粉供試小麥粉選用無蟲且品質(zhì)較好的小麥，將其除去雜質(zhì)后用自來水洗干凈，放入烘箱中60℃烘（2~3）h，烘干，將小麥的水分含量調(diào)至（140.5）%。將小麥取出冷卻至室溫，用實(shí)驗(yàn)室小麥磨粉機(jī)磨成小麥粉。小麥粉經(jīng)過80目篩子，篩去大于80目篩孔的小麥粉或面團(tuán)，篩下物即為所需的小麥粉樣品。一部分小麥粉用于所需蟲源的飼料，一部分作為DNA提取時(shí)所需的小麥粉樣品。1.2方法方法1.2.1兼并引物設(shè)計(jì)兼并引物設(shè)計(jì)以鞘翅目模式昆蟲赤擬谷盜的延長(zhǎng)因子