風(fēng)濕性疾病的自身抗體

1、風(fēng)濕性疾病的自身抗體北京協(xié)和醫(yī)院唐福林自身抗體是指自身細胞內(nèi)、細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白，見于多種風(fēng)濕性疾病，尤其在彌漫性結(jié)締組織病中更為常見。目前用于臨床的常見自身抗體有抗核抗體、抗中性粒細胞胞漿抗體、抗磷脂抗體、類風(fēng)濕因子、抗線粒體抗體等。自身抗體有多種檢測方法，包括間接免疫熒光法（IF）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、被動血凝法（PHA）、顆粒凝集法（PA）、對流免疫電泳法（CIE）、免疫雙擴散法（ID

2、）等，針對可溶性成分（如ENA、DNA、凝血因子、補體）可采用ID、CIE、ELISA、RIA法測定；針對不溶性成分可采用間接免疫熒光法。不同檢測技術(shù)的敏感性和特異性存在差別。目前各單位已采用的多種自身抗體檢測方法尚未標(biāo)準(zhǔn)化，因此某一實驗室結(jié)果難與另一個實驗室所測結(jié)果進行比較從而造成了誤判、誤導(dǎo)。判斷某一診斷試驗應(yīng)從四個特性（敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值）來評價其效用。對于自身抗體的檢測常常因為其存在精細復(fù)雜的免疫化學(xué)反應(yīng)而出

3、現(xiàn)交叉反應(yīng)。必須指出，少部分正常人有低滴度的自身抗體，故不能僅憑某一種自身抗體的存在而診斷為某一特定的疾病。如同分析任何檢測結(jié)果一樣，自身抗體的陽性或陰性不是診斷的唯一條件，必須分析檢測方法的可靠性，必要時多次重復(fù)檢測或多家實驗室檢測，只有密切結(jié)合臨床對檢驗結(jié)果進行分析才能得出正確的診斷。抗核抗體（AutoantibodytoNuclearAntigenANA）一定義：傳統(tǒng)認(rèn)為抗細胞核內(nèi)成分的抗體稱為ANA，這一概念強調(diào)了細胞核的重要性

4、，因為細胞核內(nèi)有DNA、RNA、堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種蛋白酶等復(fù)雜的化學(xué)組成，決定了ANA存在不同的成分，因此，構(gòu)成了抗核抗體譜（ANAs）。隨著免疫熒光技術(shù)的改進，先進的免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用和分子生物學(xué)的發(fā)展，目前對ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nucleicacid）和核蛋白（nucleoprotein）抗體的總稱。故現(xiàn)在對ANA靶抗原的理解已從傳統(tǒng)的細胞核擴大到整個細胞。ANA在許多風(fēng)濕性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼

5、瘡、硬皮病、干燥綜合征、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等均可陽性，因此是診斷彌漫性結(jié)締組織病的篩選抗體。健康老年人、感染性疾病和服用某些藥物（普魯卡因酰胺、肼苯噠嗪、苯妥英鈉、異煙肼等）的患者均可有ANA陽性。1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)LE細胞奠定了當(dāng)今ANAs的基礎(chǔ)。已知LE因子即是ANA，它是一種抗DNA組蛋白（DNP）復(fù)合物的抗體，目前已采用簡易和迅速的抗DNP抗體測定取代LE細胞的檢查。二測定原理和方法：常規(guī)檢測ANA的方法是以鼠肝和鼠腎為底

6、物的間接免疫熒光法。由于某些抗原如SSARO、Jo1、rRNP等在細胞漿內(nèi)比核內(nèi)含量多，因此，鼠肝或鼠腎作底物檢測常呈陰性反應(yīng)，為彌補這一不足，國外以核質(zhì)豐富的Hep2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物提高了ANA檢測的陽性率。對于ANA陽性的標(biāo)本，應(yīng)排除實驗過程中血清洗脫不盡或標(biāo)有熒光素的抗人免疫球蛋白濃度過高而造成的假陽性。必須強調(diào)指出，待測血清標(biāo)本一定要稀釋，因為低滴度的ANA可在感染性疾病、腫瘤及正常人中出現(xiàn)。未加稀釋的正常人血清可有

7、13的呈陽性ANA反應(yīng)。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗必須強調(diào)高滴度。對于ANA陰性的標(biāo)本，要考慮是否有底物保存不當(dāng)或操作過程中造成的誤差，抑或藥物治療后病情緩解所致。ANAS的熒光染色型別有五種。（1）均質(zhì)型：核質(zhì)染色均勻一致，此型與抗組蛋白抗體和抗DNA抗體有關(guān)；（2）斑點型：核質(zhì)染色呈斑點狀，核膜存在，此型多與可溶性核抗原（ENA）抗體有關(guān)；（3）核仁型：僅核仁著染熒光，與4—6SRNA抗體相關(guān)，在硬皮病中較多見；（4）

8、核周（核膜）型：熒光包繞在核膜周圍，多與抗雙鏈DNA抗體有關(guān)；（5）著絲點型：處于分裂時相的Hep2細胞為底物可出現(xiàn)依著絲點散在排列的特殊點狀圓形，與斑點型區(qū)別的重要之處在于前者核膜已消失，主要與雷諾現(xiàn)象有相關(guān)性。熒光染色核型可隨血清稀釋的改變白多肽較高特異性的為B和D帶。國際上通常用對流電泳和免疫雙擴散法檢測抗Sm抗體，其陽性率在SLE中為30%左右，抗Sm抗體對早期、不典型的SLE或經(jīng)治療緩解后SLE回顧性診斷有很大幫助。必須強調(diào)指

9、出，Sm和nRNP是同一分子復(fù)合物（RNA蛋白顆粒）中的不同抗原位點，其中的RNA富含尿嘧啶核苷（u1、u2、u4u6），如前述，Sm含有u1、u2和u4u6，而nRNP(u1RNP)僅含u1RNA。從理論上講，測得抗Sm抗體的同時，也應(yīng)測得抗u1RNP；而測得抗u1RNP則抗Sm抗體亦可為陰性。我院開展臨床檢測15年來，用電泳和雙擴散法，尚未有抗Sm抗體陽性而抗u1RNP抗體陰性，也即抗Sm抗體陽性均伴有抗u1RNP抗體，而抗u1RN

10、P抗體可以單獨存在。抗u2RNP抗體在系統(tǒng)性硬化癥伴多發(fā)性肌炎的重疊綜合征中陽性頻率較高。銀屑病及雷諾現(xiàn)象的病人也可呈陽性?？箄3RNP抗體常與系統(tǒng)性硬化相關(guān)，且常伴有原發(fā)性肺動脈高壓、骨骼肌和小腸受累。（3）抗SSARO抗體：由于該抗體與干燥綜合征（Sjogrensyndromess）相關(guān)，故取名為SSA，也有人取名于最早檢測到的病人名字Ro。SSA與Ro的抗原性、生化特點一致。SSARo是含有YYRNA的蛋白質(zhì)，更多存在于胞漿內(nèi)。在

11、以鼠肝為底物的ANA檢測中，抗SSA抗體常呈陰性反應(yīng)，而以Hep2細胞為底物，則ANA為陽性。（4）抗SSBLa、Ha抗體：另外還有一種與干燥綜合征相關(guān)的抗體稱SSB，也有人將SSB抗體以病人名字La或Ha命名。SSBLa、Ha是RNA多聚酶轉(zhuǎn)錄中的小RNA磷酸蛋白質(zhì)。臨床上常規(guī)采用對流電泳和免疫雙擴散法檢測抗SSA和抗SSB抗體。近年來發(fā)展的免疫印跡檢測中的抗SSA與分子量為60KD和52KD的兩條蛋白多肽發(fā)生反應(yīng)。有人認(rèn)為60KD的

12、多肽在SLE中較SS更為多見?？筍SB與分子量為48KD、47KD、45KD的三條蛋白多肽反應(yīng)，但48KD更具有特異性。如上所述抗SSARo和抗SSBLa、Ha與SS有關(guān)。在原發(fā)性SS病人中，抗SSARo和抗SSBLa、Ha陽性率分別為60%和40%，但在其他結(jié)締組織病人中，這兩種抗體亦可存在。以Wil2細胞提取抗原，在原發(fā)SS、SLE、RA、SD、PMDM和非結(jié)締組織病中，抗SSARo陽性率分別為75%、39%、20%、19%、25%

13、和0%；而抗SSBLa、Ha陽性率分別為59%、10%、5%、2%、5%和0%?？筍SB抗體較抗SSA抗體診斷干燥綜合征更為特異。在臨床上所謂ANA陰性的SLE病人，大部分有抗SSA抗體。進一步的研究還表明，抗SSA和抗SSB抗體陽性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯等先天性心臟病。抗SSA和抗SSB抗體常與血管炎、淋巴結(jié)腫大、白細胞減少、光過敏、皮損、紫癜等臨床癥狀相關(guān)。（5）抗rRNP抗體：rRNP（ribosomeRNP）與nRN

14、P抗原性不同，它是主要在胞漿中的一種磷酸蛋白。免疫印跡法測得抗rRNP抗體主要有38KD、16KD、15KD三條蛋白多肽。國外報道近一半的SLE病人有抗rRNP抗體。我們檢測發(fā)現(xiàn)，抗rRNP抗體在SLE、RA、PMDM、SS、MCTD和SD中的陽性率分別為24%、1.7%、9%、4%、0%、和0%。我們以免疫雙擴散法測得的24例抗rRNP陽性的SLE病人中37.5%（924）伴有中樞神經(jīng)癥狀，而在抗rRNP陰性SLE病人中，僅12.5%

15、（216）伴又中樞神經(jīng)癥狀，兩者相比有顯著性差異。我們還發(fā)現(xiàn)，抗rRNP抗體不會隨病情的緩解立即消失，可持續(xù)12年后才轉(zhuǎn)陰。對于僅有rRNP抗體陽性，ANA陰性的病人，應(yīng)密切隨訪，若干年后可能發(fā)展為典型的SLE。（6）抗PCNA（ProliferatingCellNuclearAntigen）抗體：抗增殖細胞的核抗原抗體。PCNA是分子量為35KD的DNA聚合酶δ副蛋白。用免疫雙擴散法測得在SLE病人中陽性率為35%，其他結(jié)締組織病人中