家蠶微孢子蟲表面蛋白p32.7的分離純化及p30.4基因相關(guān)領(lǐng)域分析

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶微孢子蟲表面蛋白P32.7的分離純化及P30.4基因相關(guān)領(lǐng)域分析姓名：周成申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：周澤揚2002.4.1／本研究室曾克隆出家蠶微孢予蟲Ⅳb o m b ．y c i s 表面蛋白P 3 0 ．4 的c D N A 序列一怛經(jīng)分析，發(fā)現(xiàn)該序列缺少起始密碼子，且對其的功能分析不完全。本實驗在過去研究的基礎(chǔ)上，) 對家蠶微孢子蟲表面蛋白P 3 0 ．4 基因的5 ’末端外延

2、區(qū)段進行了進一步的分析。似該c D N A 序列為基礎(chǔ)合成引物，利用快速擴增c D N A 末端R A C E 技術(shù)( 5 ’一R A C E ) ，以家蠶微孢子蟲Ⅳb o m b y c i sR N A 反轉(zhuǎn)錄的c D N A 為模板進行擴增。得到一個大小約為4 0 0 b p 的D N A 特異片段。廠y采用T A 克隆法對該目的片段進行了克隆測序。測出的序列具有引物，共3 9 5 b p 。通過B L A S T 等軟件與已克隆

3、的家蠶微孢子蟲表面蛋白P 3 0 ．4 的c D N A 序列比較分析．f 發(fā)現(xiàn)該片段與其同源性為9 7 ％，但包括于其序列中，沒能得到表面蛋白P 3 0 ．4 基因5 ’、末端外延區(qū)段的序列。分析其原因，可能與材料、引物的設(shè)計和擴增等諸多方面的因素有關(guān)。} ，) 一’四、家蠶徽孢子蟲彪b o m b y c i s 表面蛋白P 3 0 ．4 基因內(nèi)含子序列的研究，為進一步了解家蠶微孢子蟲表面蛋白P 3 0 ．4 基因的結(jié)構(gòu)等問題，對其

4、內(nèi)含子序列，進行了分析。f 以家蠶微孢予蟲表面蛋白P 3 0 ．4 的c D N A 序列為基礎(chǔ)，在其兩端合成引物，以家蠶微孢子蟲^ ：b o m b y c i s 的基因組D N A 為模板進行擴增。得到兩條D N A 特異片段：一條大小約為7 5 0 b p ，另一條大小約為4 0 0 b p 。卜廠。采用T A 克隆法對兩條特異片段進行了克隆測序。供中7 5 0 b p 的片段測出的序列共7 8 1 b p ，經(jīng)N C B I

5、比較，該片段和鼠疫桿菌( Y e r s i n i ap e s t i ss t r a i n ) 中的1 6 8個核苷酸有8 4 ％的同源性。而4 0 0 b p 的片段測出的序列共3 6 0 b p ，但僅有引物，N C B I數(shù)據(jù)庫中沒有和其同源的序列。這兩個片段的結(jié)構(gòu)和功能還有待于進一步的研究。由于家蠶微孢子蟲是比較低等的原生動物，根據(jù)越是低等的生物其內(nèi)含子及基因間序列越少的原則．家蠶微孢子蟲表面蛋白P 3 0 ．4 基因