體外共培養(yǎng)雙份臍血CD34+細(xì)胞對各自歸巢和分化能力的影響.pdf

1、背景：臍血是良好的造血干細(xì)胞(haematopoietic stem cell，HSC)來源，但臍血中含有的HSC相對較少從而限制了其在成人中的應(yīng)用。使用雙份臍血混合移植治療白血病獲得成功，激起人們對其相互作用機(jī)制的研究。研究證實，接受雙份臍血移植的患者，大部分長期造血僅來源于一份臍血，而另一份臍血在植入早期即被排斥，推測臍血與臍血間可能存在相互作用。 目的：本實驗將兩份臍血CD34+細(xì)胞體外混合培養(yǎng)通過觀察對彼此歸巢和分化能力

2、有無影響了解兩份臍血相互作用是否與CD34+細(xì)胞間的相互作用有關(guān)。 方法： 從正常人骨髓中分離擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells，MSC)，富集傳代，加速器照射(12Gy)后作為滋養(yǎng)層細(xì)胞，將免疫磁珠分選純化的兩份臍血CD34+細(xì)胞混合接種到其表面(其中一份用CFSE標(biāo)記)，共培養(yǎng)6天，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測兩份CD34+細(xì)胞表面歸巢相關(guān)分子(CD26，CD44，CD54，CD62L，CD162，C

3、D184)以及分化指標(biāo)(CD33，CD41，CD71)的變化。 結(jié)果： 1.人骨髓MSC貼壁層的建立及鑒定體外培養(yǎng)12d左右，MSC融合達(dá)70％～80％，呈漩渦狀生長。細(xì)胞傳至第三代，其表面表達(dá)CD90、CD105、CD166、CD29、CD44、CD13和CD49e，不表達(dá)CD14、CD34、CD31、CD45和HLA-DR。 2.體外共培養(yǎng)后各份CD34+細(xì)胞的歸巢能力變化臍血CD34+細(xì)胞分選富集的純度為(

4、98.25±0.93)％，實驗組在共培養(yǎng)6天后，兩份臍血CD34+細(xì)胞的比例分別降為(60.44±6.32)％和(60.24±5.12)％，但與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組各份CD34+細(xì)胞的CD26，CD44， CD62L，以及CD184的陽性率較培養(yǎng)前均無顯著變化。而CD162表達(dá)顯著下降。CD54在培養(yǎng)3天后有所上升，但培養(yǎng)6天后下降至培養(yǎng)前水平，但與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 3.體外共培養(yǎng)后各份CD34+細(xì)胞的分化能力