過表達(dá)tfe3基因在xp11.2易位性腎癌中的作用及其分子機(jī)制研究

1、分類號(hào)U D C川I1 1 I I ／I ／／1 1 ／I l l I I I ／／1 1 1 1 ／I ／1 1Y 3 2 8 1 ‘3 l l l l 0 = | i l l 1 8 I II |密級(jí)編號(hào)確方霜糾六膨博士學(xué)位論文過表達(dá)T F E 3 基因在X p l l ．2 易位性腎癌中的作用及其分子機(jī)制研究M o l e c u l e rm e c h a n i s m r e s e a r c ho f o v e r

2、e x p r e s s i o n o f T F E 3 g e n e i nX D 1 1 ．2t r a n s l o c a t i o n r e n a lc e l lc a r c i n o m a導(dǎo) 師 姓 名專 業(yè) 名 稱培 養(yǎng) 類 型論文提交日期方 媛專業(yè)型博士學(xué)位論文過表達(dá)T F E 3 基因在X p 1 1 ．2 易位性腎癌中的作用及其分子機(jī)制研究博士研究生：方媛指導(dǎo)教師：姚兵教授周曉軍教授摘要研究背

3、景和目的：) ( p 1 1 ．2 易位性腎癌是W H O 新分類的一種腎癌，發(fā)病年齡輕、預(yù)后較差，主要特征為T F E 3 基因發(fā)生易位，導(dǎo)致其過表達(dá)。因目前尚無針對(duì)過表達(dá)T F E 3建立的腎癌細(xì)胞學(xué)模型，故作用機(jī)制尚不明確，涉及的信號(hào)通路有待研究，其診斷及治療缺乏理論基礎(chǔ)。目的：1 ．篩選出適合構(gòu)建過表達(dá)T F E 3 慢病毒感染的腎癌細(xì)胞系，構(gòu)建并鑒定特異性慢病毒載體顆粒。2 ．建立慢病毒過表達(dá)T F E 3 穩(wěn)定感染的腎癌細(xì)胞

4、系，研究過表達(dá)T F E 3 對(duì)其生物學(xué)影響。3 ．明確r o T O R 及p S 6 在X p l l ．2 易位性腎癌及過表達(dá)T F E 3 細(xì)胞系中的表達(dá)，探討P 1 3 K ／A K T ／m T O R 通路在該類腫瘤中的作用。4 ．A f f y m e t r i x 基因芯片檢測X p l l ．2 易位性腎癌相關(guān)的差異基因，篩選出更多精確的靶基因。方法：1 ．R e a l t i m eP C R 和W e s t

5、 e r n b l o t 方法檢測8 種腎源性的細(xì)胞系中T F E 3 的表達(dá)水平，篩選一株進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建特異性慢病毒過表達(dá)載體顆粒并鑒定其感染效率。2 ．構(gòu)建穩(wěn)定感染過表達(dá)T F E 3 的腎癌細(xì)胞系，分為過表達(dá)組( 0 E ) ，陰性對(duì)照組( N C ) 和空載對(duì)照組( C O N ) ，并用W e s t e r n b l o t 進(jìn)行驗(yàn)證。3 ．M T T 、平板克隆法檢測不同實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖和克隆形成；利用流式細(xì)胞儀