重組腺病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的BDNF、GDNF在大鼠體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷和缺氧損傷模型中的保護(hù)作用.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的BDNF、GDNF在大鼠體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷和缺氧損傷模型中的保護(hù)作用姓名：吳偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：程焱2002.5.1中文摘要 天津醫(yī)科大學(xué)博士論文周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及維持整個(gè)個(gè)體神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能正常所必需一組內(nèi)源性可溶性蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)這類因子不僅可以促進(jìn)正常神經(jīng)元的分化和生長(zhǎng)，對(duì)一些應(yīng)激狀態(tài)也有明顯的保護(hù)性作用，特別是對(duì)于缺血性腦血管病它們可以發(fā)揮重要的

2、保護(hù)性作用。但是關(guān)于這類物質(zhì)具體的作用機(jī)制目前尚不完全明7 ，尤其是與細(xì)胞凋亡關(guān)系的問(wèn)題在某些方面還有一些分歧。、／ 因I 峨們?cè)O(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn)：( 1 ) 以腺病毒為載體轉(zhuǎn)導(dǎo)B D N F 、G D N F ：( 2 )●利用體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元觀察谷氨酸損傷模型和缺氧損傷模型的作用及其與凋亡的關(guān)系( 3 ) 觀察重組腺病毒對(duì)體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元感染情況及重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的B D N F 、G D N F 蛋白表達(dá)情況。( 4 ) 觀察重組腺

3、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的B D N F 、G D N F 對(duì)正常生長(zhǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響及對(duì)谷氨酸損傷和缺氧損傷細(xì)胞凋亡和b c l 一2 蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)中主要包括免疫組化、原位凋亡檢測(cè)、W e s t e r nB l o t t i n g 檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)方法。通過(guò)觀察腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的B D N F 年I JG D N F 在兩種損傷模型中所起的作用，我們得出以下結(jié)果：外源性加入谷氨酸和去除培養(yǎng)液中的氧氣能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元出現(xiàn)明顯損傷，細(xì)

4、胞存活率明顯下降同時(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)也出現(xiàn)明顯變化，如部分細(xì)胞水腫、死亡等；重組腺病毒對(duì)體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的感染率能達(dá)虱J 3 0 ％左右，而且W e s t e r nB l o t t i n g 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明目的蛋白也能被有效表達(dá)；腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的B D N F 、G D N F 能使體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸和缺氧損傷細(xì)胞凋亡明顯減少，并能使b c l 一2 蛋白表達(dá)升高b ＼根據(jù)以上結(jié)果我們得出以下結(jié)論：1 ．體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元仍保持神