七種雙酚類化合物雌激素活性評價及其在食品中檢測方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、雙酚S(Bisphenol S,BPS)、雙酚F(Bisphenol F,BPF)、雙酚A(Bisphenol A, BPA)、雙酚B(Bisphenol B,BPB)、雙酚AF(Bisphenol AF,BPAF)、四氯雙酚A(Tetrachlorobisphenol A,TCBPA)和四溴雙酚A(Tetrabromobisphenol A,TBBPA)是7種常見的雙酚類化合物,廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中。同時這7種化合物也是備受關(guān)注的環(huán)境

2、內(nèi)分泌干擾物和污染物。
　　本研究針對這7種化合物開展了一系列的工作,其中主要內(nèi)容有:
　　1.比較研究了7中雙酚類化合物的雌激素效應(yīng),包括利用WST-8新型四唑鹽細胞增殖實驗,考察了這7種化合物對人乳腺癌細胞T47D和MCF-7的增殖效應(yīng),通過實時熒光定量PCR檢測了這7種化合物對雌激素受體α下游基因組織蛋白酶 D(CTSD)、乳腺癌雌激素調(diào)控蛋白1(GREB1)和三葉因子1(TFF1)表達的調(diào)控作用,考察了BPAF對ER

3、K的激活作用。
　　2.利用固相萃取結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)建立了谷物類食品中BPS、BPF、BPA、BPB和BPAF的檢測方法。
　　3.利用固相萃取結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)建立了酒水飲料中這7種雙酚類化合物的檢測方法。
　　4.利用所建立的檢測方法對我國部分省市總膳食樣品中谷物類、豆類、薯類和酒水飲料類中雙酚類化合物進行暴露評估。
　　主要結(jié)果如下:
　　1.在所選濃度范圍內(nèi),除了TBBPA,其他6種雙

4、酚類化合物均能顯著刺激T47D和MCF-7細胞的增殖,并且呈現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。通過S曲線擬合,計算得出這6種化合物的半數(shù)效應(yīng)濃度,并得出其雌激素活性大小為:BPAF>BPB>BPA>BPF>BPS>TCBPA>TBBPA;在所選濃度范圍內(nèi),7種雙酚類化合物均能顯著誘導(dǎo)雌激素受體α下游基因的表達;BPAF在100 nmol/L濃度下即能快速激活MAPKs信號通路中ERK的磷酸化水平,通過非基因組途徑發(fā)揮其內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。
　　2.

5、建立了谷物類食品中五種雙酚類化合物的檢測方法:樣品經(jīng)乙腈超聲提取兩次后,大米、面粉經(jīng)HLB柱富集凈化,玉米面經(jīng)HLB串聯(lián)Sep-Pak NH2柱富集凈化,最后用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測目標(biāo)化合物。5種目標(biāo)化合物在3種基質(zhì)中高中低加標(biāo)水平回收率分別為62.2％-117.4%、61.2%-121.6%和60.8%-112.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%,定量限在0.01-0.25μg/kg之間。應(yīng)用所建方法,對北京市售的1

6、2份谷物類食品進行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)BPS、BPA和BPAF檢出率較高,其中BPS和BPA達到100%。
　　3.建立了酒水飲料中7種雙酚類化合物的檢測方法:樣品上樣前用甲酸將PH調(diào)至3-5,果汁、可樂直接經(jīng) Plexa柱富集凈化、白酒用超純水稀釋一倍后經(jīng) Plexa柱富集凈化,最后用 LC-MS/MS方法檢測目標(biāo)化合物。7種目標(biāo)化合物在果汁、可樂和白酒中3個加標(biāo)水平回收率分別為81.1%-111.1%、59.4%-101.1%、7