山藥糖肽的分離純化及結(jié)構(gòu)解析.pdf

1、山藥營養(yǎng)價值高，含有糖肽等多種生物活性物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗癌、降糖、降脂、調(diào)節(jié)脾胃等作用。但是目前，我國的山藥主要用來鮮食和生產(chǎn)山藥片，深加工的產(chǎn)品還不多，在很大程度上限制了我國山藥的生產(chǎn)和銷售。因此，提取山藥中的有效成分對提高人們的健康水平有十分重要的意義，而且還可以促進山藥深加工的發(fā)展。本文對山藥糖肽的分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點及腸道消化吸收進行了研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴山藥糖蛋白的提取及山藥糖肽制備的工

2、藝：通過鹽提醇沉的方法提取山藥中的糖蛋白，通過單因素試驗及正交試驗，得到提取山藥糖蛋白的最佳工藝參數(shù)為：NaCl濃度為0.6 mol/L、浸提時間為24 h、料液比1:10；總蛋白含量為2.39％、總糖含量為0.33%，糖蛋白的提取得率為0.313%。通過使用復(fù)合蛋白酶酶解山藥糖蛋白制備山藥糖肽，通過單因素試驗及正交試驗，得到山藥糖肽制備的最佳酶解工藝參數(shù)為：酶添加量為0.8 mg/g，酶解 pH值為7、酶解時間為4 h、酶解溫度為50

3、℃；水解度為28.1%。⑵山藥糖肽的純化及鑒定：山藥糖肽粗品經(jīng)Q Sepharose FF陰離子柱層析分離得到半純品GLP-I；GLP-I進一步經(jīng)過Sephacryl S-300HR凝膠柱層析純化后，得到目標糖肽GLP-I-I；目標糖肽GLP-I-I經(jīng)過Sephacryl S-300HR凝膠柱后得到單一對稱的洗脫峰，說明山藥糖肽GLP-I-I的組分單一。經(jīng)SDS-PAGE電泳試驗得到，GLP-I-I考馬斯亮藍染色及 PAS鑒定染色的單一

4、條帶在同一位置，說明GLP-I-I為組分單一的糖肽；測得的GLP-I-I的相對分子質(zhì)量為40.98KD。⑶GLP-I-I的理化性質(zhì)：通過旋轉(zhuǎn)粘度計測黏度得到，當GLP-I-I濃度低于7.5%時，黏度低并且隨著濃度的增加變化緩慢，但當濃度高于7.5%時，黏度增加顯著，當濃度達到10%時黏度變化很大且達到了最大值215 mpa·s。經(jīng)DSC試驗測得GLP-I-I的熱收縮溫度Ts為121.54℃。氨基酸分析得到，GLP-I-I中含有17種氨基

5、酸，七種人體必需氨基酸，必需氨基酸含量占總氨基酸含量的39.543%。氣相色譜(GC)分析檢測得到 GLP-I-I中含有九種單糖，氨基葡萄糖、甘露糖、氨基半乳糖、巖藻糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖，含量比例為：35.735：30.687：7.543：8.249：1.321：4.542：5.423：2.135：4.365。其中氨基葡萄糖和甘露糖含量較高，占總糖含量的66.422%。⑷GLP-I-I的結(jié)構(gòu)特點：經(jīng)β-消除反應(yīng)及紫

6、外掃描試驗，證明了 GLP-I-I中含有O-糖苷鍵；經(jīng)PNGaseF糖苷酶酶解GLP-I-I后進行電泳試驗，證明了GLP-I-I中含有 N-糖苷鍵。由紅外掃描試驗得到：GLP-I-I樣品中存在糖肽的特征吸收峰3410.03 cm-1、1637.50cm-1，GLP-I-I的蛋白二級結(jié)構(gòu)為α-螺旋結(jié)構(gòu)，GLP-I-I中的糖苷鍵為吡喃型。質(zhì)譜分析得到：GLP-I-I氨基酸序列中至少存在6個N-糖基化位點。⑸經(jīng)小鼠試驗得到，攝食山藥糖肽或糖蛋