280nmLED-紫外線應(yīng)用于皮瓣缺血再灌注損傷后治療的實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過應(yīng)用280nmLED(Light Emitting Diode,LED發(fā)光二極管)紫外線在大鼠腹部皮瓣產(chǎn)生缺血再灌注損傷后對大鼠腹部術(shù)區(qū)進(jìn)行局部照射，來觀察280nmLED紫外線對大鼠皮瓣再灌注損傷后組織的治療效果，并就相應(yīng)的實驗組和對照組所產(chǎn)生的結(jié)果來探討其相關(guān)及可能的作用機制。
　　方法:
　　將同一批在相同環(huán)境下長成的 Wistar健康雄性鼠共40只，隨機分4組，280nm、320nm的實驗組各1

2、組，空白組1組，10只一組，剩下的10只則可作為同批次相同環(huán)境下成長的替補組大鼠，防止實驗中的大鼠因意外造成皮瓣損傷影響到實驗結(jié)果或死去造成實驗結(jié)果缺失的，為保證實驗的正常進(jìn)行，選擇替補大鼠按照相應(yīng)的實驗方法繼續(xù)完成實驗。手術(shù)及替補組大鼠在實驗正式開始前均養(yǎng)于SPF動物實驗室1w，并于術(shù)前1d禁食；10%水合氯醛腹腔麻醉行腹部皮瓣模型制作手術(shù)，在所有實驗及空白組大鼠腹部皮膚建立再灌注損傷皮瓣的模型后，對于280nm和320nm兩個實驗組

3、大鼠模型建成后即立刻行對應(yīng)的人工紫外線術(shù)區(qū)皮瓣照射1次，時間為持續(xù)4 min，后持續(xù)單籠飼養(yǎng)，正常飼養(yǎng)進(jìn)食，直至取標(biāo)本處死；從術(shù)后第1天開始每天按時按量對兩個實驗組的腹部皮瓣進(jìn)行相應(yīng)波長的紫外線照射，2次/1d，每次4 min,共8min，持續(xù)7 d；對于空白組大鼠其皮瓣模型制備成功后，不予任何處理措施，等空白組鼠完全從麻醉中醒后給予單籠正常飼養(yǎng)進(jìn)食；術(shù)后每天進(jìn)行觀察，若出現(xiàn)大鼠啃食皮瓣致皮瓣毀損影響結(jié)果的，及時按相同實驗方法進(jìn)行相應(yīng)組

4、的實驗進(jìn)行替補大鼠實驗；三組實驗鼠都在術(shù)后7d時候通過坐標(biāo)貼紙的方法來測算腹部手術(shù)區(qū)域皮瓣的成活面積同時計算相應(yīng)皮瓣的成活率；手術(shù)后7d給予各組大鼠處死，并在各組大鼠的腹部相應(yīng)術(shù)區(qū)相應(yīng)的位置，切取皮瓣組織并立即相應(yīng)處理制作成病理切片再行免疫組織化學(xué)染色，后通過顯微鏡及 Image-Pro Plus6.0測算陽性血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)的表達(dá)面積以及所占百分比，使用

5、 TUNEL實驗方法檢測組織標(biāo)本中細(xì)胞中的凋亡比率，通過 SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，獲取結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　280nm,320nm和空白三組術(shù)后7 d皮瓣的成活率檢測分別為62.38%±8.64%、54.49%±4.48%和39.61%±4.22%，對應(yīng)的組織中 VEGF陽性表數(shù)據(jù)分別為91.39%±9.29%、70.46%±4.02%和34.97%±3.08%，對應(yīng)分組皮瓣組織中細(xì)胞凋亡率顯示為53.06%±5.64

6、%、64.72%±3.73%和32.82%±1.72%。所有的實驗的對應(yīng)數(shù)據(jù)指標(biāo)中，280nm、320nm和對照組相比，P＜0.05；280nm和320nm兩實驗組比較，P＜0.05。
　　結(jié)論:
　　280nmLED-紫外線局部照射治療大鼠腹部皮瓣缺血再灌注后損傷效果明顯，作用機制與皮瓣中 VEGF表達(dá)量的提高促進(jìn)毛細(xì)血管新生而對組織的成活有積極作用；經(jīng)紫外線照射的皮瓣組織細(xì)胞凋亡率升高，且紫外線波長較短照射組細(xì)胞凋亡情況