擴張皮瓣的缺血—再灌注損傷機制及其干預的實驗研究.pdf

1、任何組織、器官缺血達一定時間和一定程度后將會引起組織、細胞的損傷，在這些損傷的組織、細胞中發(fā)生再灌注時，損傷加重，甚至出現(xiàn)不可逆的損傷性變化，此定義為缺血—再灌注損傷(ischemia—reperfusion，IR)。缺血—再灌注在臨床上是一種常見而又嚴重的病理過程，許多缺血性疾患在獲得有效救治時或多或少面臨IR損傷的問題。目前對心肌等缺血—再灌注機制報導較多，對皮瓣的缺血—再灌注機制研究甚少。對擴張皮瓣的缺血—再灌注機制的研究更是少之

2、又少。然而擴張皮瓣缺血—再灌注損傷卻是皮瓣壞死的最重要的原因之一，因此有必要做進一步研究。 研究目的: 1.觀測臨床病例中不同注水量的擴張皮瓣之間的血流動力學變化的差異。 2.建立一個穩(wěn)定的小型豬擴張皮瓣模型，使小型豬擴張皮瓣模型可以作為常規(guī)模型進行擴張皮瓣實驗研究。并描繪出在無干預情況下小型豬擴張皮瓣模型皮瓣形成過程中MVD及MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關系。 3.設計不同注水量的擴張皮瓣來

3、探討注水量與擴張皮瓣缺血—再灌注損傷的關系，挑選出擴張皮瓣合適的注水量。 4.將脂質(zhì)體攜載前列腺素E1(PGE1)用于小型豬擴張皮瓣模型中，研究其對擴張皮瓣缺血—再灌注損傷機制的影響并探討其干預機制。 研究方法: 1.選取行面頸部擴張器埋置術(shù)患者5名，在埋置擴張器前，按擴張器規(guī)格標準量注水后30分鐘，超量50％注水后30分鐘，超量100％注水后30分鐘，形成擴張皮瓣后1周和2周，用激光多普勒血流測定儀在擴張皮膚中

4、央同一部位測量擴張皮膚血流量的平均PU值及平均波幅。 2.建立小型豬擴張隨意皮瓣缺血—再灌注損傷模型，并設立不擴張組，剝離組和正常對照組做對照，在術(shù)后不同時間點，皮瓣不同部位獲取標本，通過大體標本觀察，HE染色，免疫組化檢測及透射電鏡等方法觀察和檢測MVD，MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關系。 3.實驗皮瓣分為5組，標準注水組，超量50％注水組，超量100％注水組，不擴張組和正常對照組，在術(shù)后不同時間點獲取標本

5、，通過上述實驗二方法檢測MVD，MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關系。 4.實驗動物分為2組，術(shù)后使用LipoPGE1和未用藥物組。用實驗二方法檢測微血管密度，MDA，MPO與各時點之間的變化關系；在給藥前及給藥結(jié)束時，用WTS溫度測量計測量皮瓣表面溫度變化；利用Real-TimePCR技術(shù)檢測兩組皮瓣內(nèi)的多項基因表達，包括VEGF，iNOS，Ang—1，TGF-β1基因等，比較他們在各組皮瓣中的表達情況。 研究

6、結(jié)果: 1.皮膚擴張后的血流量明顯高于正常皮膚(P<0.05)。擴張皮膚血流的波幅亦明顯高于正常皮膚，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且隨著擴張量的增加逐漸增加，超量擴張皮膚的波幅與正常皮膚相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。正常皮膚和形成擴張皮瓣術(shù)后2周的皮膚的血流值之間差異無統(tǒng)計學意義，但與各擴張組皮膚之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；正常皮膚與形成擴張皮瓣術(shù)后2周皮膚的血流波幅之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

7、，與各擴張組皮膚之間的差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。當注水量超量100％時，血流量反而下降而其波幅繼續(xù)上升。 2.擴張器埋置術(shù)后皮瓣MVD迅速上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后第10天左右達到高峰，而MDA含量和MPO活性在皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達到高峰。皮瓣蒂部及遠端的MVD明顯大于皮瓣中部的MVD。 3.超量50％注水組擴張器埋置術(shù)后皮瓣MVD迅速上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達到高峰，超量100％注水組擴張器埋置術(shù)后皮瓣MVD

8、輕度上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達到較高水平。隨著注水量的增加，MDA含量和MPO活性增加，高峰均集中在術(shù)后24h。在超量注水50％時，其存活面積有所增加。但當注水量超100％時，皮瓣的存活率反而有下降的趨勢。 4.PGE1用藥組和未用藥物組皮瓣在MVD，MDA含量，MPO活性，皮瓣存活面積方面均有顯著性差異。用藥后皮瓣表面溫度略有上升。用藥組與未用藥組比較，VEGF，iNOS，Ang—1基因表達均降低，TGF-β1基因表達增高

9、，但組間差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 研究結(jié)論: 1.擴張皮瓣血流量及其波幅變化比正常皮膚大，隨著擴張量的增加，其表現(xiàn)愈加明顯。但當注水量超量達到100％時，血流量反而下降而其波幅繼續(xù)上升。因此，超量擴張100％后，擴張皮瓣的安全性反而下降。激光多普勒血流監(jiān)測儀由于其無創(chuàng)性及可重復性，能夠連續(xù)監(jiān)測，并能反映微循環(huán)的瞬間改變情況，是臨床上監(jiān)測皮瓣血運的有力輔助工具之一。 2.成功建立了穩(wěn)定的小型豬擴張皮瓣模

10、型，并形成了相對簡單、容易推廣的操作流程，使小型豬擴張皮瓣模型可以作為常規(guī)模型進行擴張皮瓣實驗研究。并描繪出在無干預情況下小型豬擴張皮瓣模型皮瓣形成過程中MVD及MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關系。 3.擴張皮瓣注水超過額定注水量的50％以上皮瓣擴張面積增加不明顯但是皮瓣存活面積明顯下降，并且皮膚擴張率未見明顯增加。擴張皮瓣隨著注水量的增加，皮瓣組織的MVD呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢，MDA及MPO的值呈現(xiàn)增加的趨勢。擴張

11、皮瓣的合適注水量不應超量大于50％。擴張皮瓣的有效擴張是擴張器規(guī)格體積的1.5倍左右。 4.皮瓣經(jīng)過擴張后，Ⅱ期擴張器取出時，即刻減張，新生的毛細血管回流的能力較差，而擴張器取出后動脈供血增加，產(chǎn)生靜脈回流障礙型皮瓣缺血—再灌注損傷。靜脈注射前列腺素E1能同時改善皮瓣的動靜脈血流，增加皮瓣血管密度，增加局部血流量，促進皮瓣的生長，可以增加皮瓣存活面積。LipoPGE1對皮瓣缺血—再灌注損傷具有潛在臨床治療價值。但其減輕擴張皮瓣缺