擴(kuò)張皮瓣的缺血—再灌注損傷機(jī)制及其干預(yù)的實驗研究.pdf

1、任何組織、器官缺血達(dá)一定時間和一定程度后將會引起組織、細(xì)胞的損傷，在這些損傷的組織、細(xì)胞中發(fā)生再灌注時，損傷加重，甚至出現(xiàn)不可逆的損傷性變化，此定義為缺血—再灌注損傷(ischemia—reperfusion，IR)。缺血—再灌注在臨床上是一種常見而又嚴(yán)重的病理過程，許多缺血性疾患在獲得有效救治時或多或少面臨IR損傷的問題。目前對心肌等缺血—再灌注機(jī)制報導(dǎo)較多，對皮瓣的缺血—再灌注機(jī)制研究甚少。對擴(kuò)張皮瓣的缺血—再灌注機(jī)制的研究更是少之

2、又少。然而擴(kuò)張皮瓣缺血—再灌注損傷卻是皮瓣壞死的最重要的原因之一，因此有必要做進(jìn)一步研究。 研究目的: 1.觀測臨床病例中不同注水量的擴(kuò)張皮瓣之間的血流動力學(xué)變化的差異。 2.建立一個穩(wěn)定的小型豬擴(kuò)張皮瓣模型，使小型豬擴(kuò)張皮瓣模型可以作為常規(guī)模型進(jìn)行擴(kuò)張皮瓣實驗研究。并描繪出在無干預(yù)情況下小型豬擴(kuò)張皮瓣模型皮瓣形成過程中MVD及MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關(guān)系。 3.設(shè)計不同注水量的擴(kuò)張皮瓣來

3、探討注水量與擴(kuò)張皮瓣缺血—再灌注損傷的關(guān)系，挑選出擴(kuò)張皮瓣合適的注水量。 4.將脂質(zhì)體攜載前列腺素E1(PGE1)用于小型豬擴(kuò)張皮瓣模型中，研究其對擴(kuò)張皮瓣缺血—再灌注損傷機(jī)制的影響并探討其干預(yù)機(jī)制。 研究方法: 1.選取行面頸部擴(kuò)張器埋置術(shù)患者5名，在埋置擴(kuò)張器前，按擴(kuò)張器規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)量注水后30分鐘，超量50％注水后30分鐘，超量100％注水后30分鐘，形成擴(kuò)張皮瓣后1周和2周，用激光多普勒血流測定儀在擴(kuò)張皮膚中

4、央同一部位測量擴(kuò)張皮膚血流量的平均PU值及平均波幅。 2.建立小型豬擴(kuò)張隨意皮瓣缺血—再灌注損傷模型，并設(shè)立不擴(kuò)張組，剝離組和正常對照組做對照，在術(shù)后不同時間點，皮瓣不同部位獲取標(biāo)本，通過大體標(biāo)本觀察，HE染色，免疫組化檢測及透射電鏡等方法觀察和檢測MVD，MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關(guān)系。 3.實驗皮瓣分為5組，標(biāo)準(zhǔn)注水組，超量50％注水組，超量100％注水組，不擴(kuò)張組和正常對照組，在術(shù)后不同時間點獲取標(biāo)本

5、，通過上述實驗二方法檢測MVD，MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關(guān)系。 4.實驗動物分為2組，術(shù)后使用LipoPGE1和未用藥物組。用實驗二方法檢測微血管密度，MDA，MPO與各時點之間的變化關(guān)系；在給藥前及給藥結(jié)束時，用WTS溫度測量計測量皮瓣表面溫度變化；利用Real-TimePCR技術(shù)檢測兩組皮瓣內(nèi)的多項基因表達(dá)，包括VEGF，iNOS，Ang—1，TGF-β1基因等，比較他們在各組皮瓣中的表達(dá)情況。 研究

6、結(jié)果: 1.皮膚擴(kuò)張后的血流量明顯高于正常皮膚(P<0.05)。擴(kuò)張皮膚血流的波幅亦明顯高于正常皮膚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且隨著擴(kuò)張量的增加逐漸增加，超量擴(kuò)張皮膚的波幅與正常皮膚相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。正常皮膚和形成擴(kuò)張皮瓣術(shù)后2周的皮膚的血流值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但與各擴(kuò)張組皮膚之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；正常皮膚與形成擴(kuò)張皮瓣術(shù)后2周皮膚的血流波幅之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)

7、，與各擴(kuò)張組皮膚之間的差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。當(dāng)注水量超量100％時，血流量反而下降而其波幅繼續(xù)上升。 2.擴(kuò)張器埋置術(shù)后皮瓣MVD迅速上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后第10天左右達(dá)到高峰，而MDA含量和MPO活性在皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達(dá)到高峰。皮瓣蒂部及遠(yuǎn)端的MVD明顯大于皮瓣中部的MVD。 3.超量50％注水組擴(kuò)張器埋置術(shù)后皮瓣MVD迅速上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達(dá)到高峰，超量100％注水組擴(kuò)張器埋置術(shù)后皮瓣MVD

8、輕度上升，皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)后24h左右達(dá)到較高水平。隨著注水量的增加，MDA含量和MPO活性增加，高峰均集中在術(shù)后24h。在超量注水50％時，其存活面積有所增加。但當(dāng)注水量超100％時，皮瓣的存活率反而有下降的趨勢。 4.PGE1用藥組和未用藥物組皮瓣在MVD，MDA含量，MPO活性，皮瓣存活面積方面均有顯著性差異。用藥后皮瓣表面溫度略有上升。用藥組與未用藥組比較，VEGF，iNOS，Ang—1基因表達(dá)均降低，TGF-β1基因表達(dá)增高

9、，但組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 研究結(jié)論: 1.擴(kuò)張皮瓣血流量及其波幅變化比正常皮膚大，隨著擴(kuò)張量的增加，其表現(xiàn)愈加明顯。但當(dāng)注水量超量達(dá)到100％時，血流量反而下降而其波幅繼續(xù)上升。因此，超量擴(kuò)張100％后，擴(kuò)張皮瓣的安全性反而下降。激光多普勒血流監(jiān)測儀由于其無創(chuàng)性及可重復(fù)性，能夠連續(xù)監(jiān)測，并能反映微循環(huán)的瞬間改變情況，是臨床上監(jiān)測皮瓣血運的有力輔助工具之一。 2.成功建立了穩(wěn)定的小型豬擴(kuò)張皮瓣模

10、型，并形成了相對簡單、容易推廣的操作流程，使小型豬擴(kuò)張皮瓣模型可以作為常規(guī)模型進(jìn)行擴(kuò)張皮瓣實驗研究。并描繪出在無干預(yù)情況下小型豬擴(kuò)張皮瓣模型皮瓣形成過程中MVD及MDA含量，MPO活性與各時點之間的變化關(guān)系。 3.擴(kuò)張皮瓣注水超過額定注水量的50％以上皮瓣擴(kuò)張面積增加不明顯但是皮瓣存活面積明顯下降，并且皮膚擴(kuò)張率未見明顯增加。擴(kuò)張皮瓣隨著注水量的增加，皮瓣組織的MVD呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢，MDA及MPO的值呈現(xiàn)增加的趨勢。擴(kuò)張

11、皮瓣的合適注水量不應(yīng)超量大于50％。擴(kuò)張皮瓣的有效擴(kuò)張是擴(kuò)張器規(guī)格體積的1.5倍左右。 4.皮瓣經(jīng)過擴(kuò)張后，Ⅱ期擴(kuò)張器取出時，即刻減張，新生的毛細(xì)血管回流的能力較差，而擴(kuò)張器取出后動脈供血增加，產(chǎn)生靜脈回流障礙型皮瓣缺血—再灌注損傷。靜脈注射前列腺素E1能同時改善皮瓣的動靜脈血流，增加皮瓣血管密度，增加局部血流量，促進(jìn)皮瓣的生長，可以增加皮瓣存活面積。LipoPGE1對皮瓣缺血—再灌注損傷具有潛在臨床治療價值。但其減輕擴(kuò)張皮瓣缺