NBD-F衍生劑光譜學(xué)特性及其在高效液相色譜中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的:
　　 苯并呋咱(benzofurazan)類衍生劑是一類已廣泛應(yīng)用于生物樣品測(cè)定的衍生劑，能與氨基酸、多肽及部分蛋白質(zhì)發(fā)生衍生反應(yīng)，生成的衍生物可用紫外或熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。本文通過研究苯并呋咱類衍生劑4-氟-7-硝基-2，1，3-苯并惡二唑（4-fluoro-7-nitrobenzofurazan，NBD-F）的光譜學(xué)特性及量子產(chǎn)率，優(yōu)化了NBD-F與待測(cè)物衍生反應(yīng)條件，建立一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏的高效液相色譜測(cè)定保健食

2、品或生物樣品中?；撬帷⒐入赘孰?、氨基葡萄糖鹽酸鹽的方法。
　　 方法與結(jié)果:
　　 使用分光光度計(jì)測(cè)定了NBD-F及其衍生產(chǎn)物的紫外可見吸收光譜、熒光光譜性質(zhì)和量子產(chǎn)率，發(fā)現(xiàn)NBD-F在堿性條件下，可激發(fā)波長(zhǎng)為370nm，475nm，發(fā)射波長(zhǎng)為540nm處產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光。在0.1-100μmol/L濃度范圍時(shí)，熒光強(qiáng)度與濃度存在線性關(guān)系。以羅丹明B為參比，測(cè)得NBD-F在激發(fā)波長(zhǎng)475nm處熒光量子產(chǎn)率為0.86。

3、>　　 NBD-F柱前衍生高效液相色譜紫外檢測(cè)器測(cè)定保健食品中牛磺酸含量，熒光檢測(cè)器測(cè)定人、大鼠血漿中和大鼠肝、腦組織中?；撬岷?。色譜條件為：色譜柱Diamonsil C18柱(5μm，250x4.6mm)；流動(dòng)相：乙腈-磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L，pH6.0)(16:84，v/v)；柱溫25℃；流速1.0ml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)λ=470nm，熒光檢測(cè)器λex=475nm，λem=536nm；進(jìn)樣量10μL。結(jié)果熒光檢測(cè)牛

4、磺酸線性范圍為0.1μmol/L-30.0μmol/L，r=0.9995，最低檢測(cè)限（S/N=3）0.010μmol/L，日內(nèi)和日間變異分別為5.3％，7.7％。將此方法用于測(cè)定生物樣品中?；撬岷繙y(cè)定正常男女血漿中?；撬岷糠謩e為37.8±5.1，38.1±5.5μmol/L，正常大鼠血漿中?；撬岷繛?63±24μmol/L，正常大鼠肝、腦中牛磺酸含量分別為1.3±0.2，1.9±0.1μmol/g。
　　 柱前衍生高效液相

5、色譜測(cè)定生物樣品中谷胱甘肽的含量，使用乙腈-0.02mol/L磷酸鹽溶液(23:77，v/v)為流動(dòng)相，柱溫25℃；流速1.0mL/min；熒光檢測(cè)：λex=475nm，λem=542nm；進(jìn)樣量10μL。熒光檢測(cè)谷胱甘肽線性范圍為0.1μmol/L-10.0μmol/L，r=0.9988.日內(nèi)和日間變異分別為6.3％，6.9％。將此方法用于測(cè)定生物樣品中谷胱甘肽含量，測(cè)定正常男女血漿中牛谷胱甘肽含量分別為4.70±0.92，4.72±

6、0.94μmol/L，測(cè)定正常組和肝性腦病組大鼠血漿中谷胱甘肽值分別為5.70±1.01，3.42±0.54μmol/L，正常大鼠肝、腦中谷胱甘肽含量分別為5.46±0.62,0.63±0.10μmol/g。
　　 柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定保健食品中氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量，色譜條件為：Diamonsil C18250×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L KH2PO4(0.05％TFA，pH4.0)=32:68

7、(v/v)，柱溫：35℃，流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：466nm，進(jìn)樣體積10μL。線性范圍是1.0-500mg/L，相關(guān)系數(shù)為0.9995，最低檢測(cè)限（S/N=3）為0.20mg/L，樣品的回收率為95.6％-103.7％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5％-7.7％。
　　 結(jié)論:
　　 本文研究了苯并呋咱類衍生劑NBD-F光譜學(xué)特性，優(yōu)化了NBD-F與?；撬?、谷胱甘肽、氨基葡萄糖鹽酸鹽衍生反應(yīng)的條件，并對(duì)衍生產(chǎn)物的吸收