冰片聚乙二醇共修飾固體脂質(zhì)納米粒的構(gòu)建及腦靶向研究.pdf

1、近年來(lái)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和致死率日益增高，給患者身心健康帶來(lái)痛苦，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，血腦屏障(blood brain-barrier，BBB)的存在限制了治療藥物的入腦轉(zhuǎn)運(yùn)，藥物在腦內(nèi)濃度偏低，使得該類疾病的治療效果不佳。開(kāi)發(fā)具有腦靶向性的新型釋藥系統(tǒng)成為當(dāng)前藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)。本課題以冰片(BO)修飾的二油酰基磷脂酰乙醇胺(BO-DOPE)、PEG化硬脂酸(PEG-SA)為基本載體材料，進(jìn)行適當(dāng)配比構(gòu)建一定修飾率的冰

2、片-PEG共修飾固體脂質(zhì)納米粒(bpSLN)，旨在用于載藥透過(guò)血腦屏障。
　　空白bpSLN的構(gòu)建:以丁二酸酐為連接臂，通過(guò)酯化和酰胺反應(yīng)合成BO-DOPE，經(jīng)MS和1H-NMR及13C-NMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確證。BO-DOPE與PEG-SA作為脂材，采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備bpSLN。以粒徑和穩(wěn)定性為考察指標(biāo)對(duì)工藝和處方進(jìn)行初步篩選，得到粒徑75.8±7.5 nm，Zeta電位-26.92±1.95 mV的空白bpSLN。

3、>　　體外BBB模型的建立:以HBMEC為模型細(xì)胞建立體外BBB模型，通過(guò)光鏡、透射電鏡觀察形態(tài)、測(cè)定跨內(nèi)皮電阻TEER以及14C-蔗糖的滲透系數(shù)等手段對(duì)所建模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。HBMEC細(xì)胞在光鏡下呈梭形，TEM顯示細(xì)胞間形成了緊密連接，模型的TEER值為277.57±2.77Ω·cm2，14C-蔗糖的滲透系數(shù)為1.85×10-3cm/min。
　　bpSLN體外評(píng)價(jià):以香豆素-6為示蹤劑制備載藥bpSLN，同時(shí)制備冰片單獨(dú)修飾SLN

4、(bSLN)，未經(jīng)修飾SLN作為對(duì)照組，進(jìn)行體外評(píng)價(jià)。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明，低濃度時(shí)，bpSLN，bSLN，SLN三組對(duì)HBMEC的毒性無(wú)明顯差異;高濃度時(shí)，bSLN、bpSLN比SLN的細(xì)胞毒性低。攝取試驗(yàn)中，HBMEC對(duì)bSLN的攝取最強(qiáng)，對(duì)bpSLN組的攝取弱于bSLN組。bpSLN和bSLN在轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始20min時(shí)，跨膜表觀滲透系數(shù)Papp分別達(dá)到最大值98.3×10-6，95×10-6 cm/s，SLN的Papp隨時(shí)間延長(zhǎng)緩慢增

5、加，4h達(dá)到最大值51.3×10-6 cm/s。bSLN和bpSLN的Pappmax分別是SLN的1.91倍和1.85倍。機(jī)制研究中，bpSLN與BBB模型共孵育后，很快開(kāi)放細(xì)胞間的緊密連接，與TEER值的經(jīng)時(shí)變化吻合;移除bpSLN后1h緊密連接開(kāi)始恢復(fù)，4h后緊密連接重新長(zhǎng)成。提示bpSLN對(duì)緊密連接的開(kāi)放作用是可逆性的。
　　bpSLN體內(nèi)腦靶向性評(píng)價(jià):以Cy7為示蹤劑，分別制備載藥SLN，bSLN和bpSLN，給予小鼠尾靜