酶法制備低聚葡甘露糖和低聚半乳糖工藝研究.pdf

1、功能性低聚糖不能被消化酶降解，也不能被直接吸收利用，但能選擇性增殖益生菌，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有益影響。低聚葡甘露糖和低聚半乳糖是兩種重要的功能性低聚糖，工業(yè)上均采用酶法制備：β-甘露聚糖酶水解甘露聚糖制備低聚葡甘露糖；β-半乳糖苷酶催化乳糖合成低聚半乳糖。
　　β-1,4-D-甘露聚糖酶（EC3.2.1.78，β-1,4-D-mannanmannohydrolase，簡(jiǎn)稱β-甘露聚糖酶）是水解β-1,4-D-甘露糖苷鍵的內(nèi)切酶，可水解魔芋

2、甘露聚糖生成低聚葡甘露糖。本文通過響應(yīng)面法優(yōu)化了枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基組成，最優(yōu)組合為（g/L）：魔芋34.68，(NH4)2SO44.69，Na2HPO4?12H2O4.00，KH2PO40.30，CaCO32.69，CaCl21.00，NaCO31.00，MgCl2?6H2O0.60，優(yōu)化后發(fā)酵液酶活從120.42U/mL提高到153.75U/mL，增值了27.68％。
　　枯草芽孢桿菌β-甘露聚糖酶為中溫酶，最適pH為7.0

3、，最適溫度為60oC。采用離心和絮凝等純化方法制得β-甘露聚糖酶，并用于水解魔芋制備低聚葡甘露糖。酶法制備的低聚葡甘露糖聚合度為2~10，其中低聚三糖含量最高，聚合度主要為2~4的低聚糖占61.84%。
　　β-D-半乳糖苷酶（EC3.2.1.23,β-D-galactosidegalactohydrolase，簡(jiǎn)稱β-半乳糖苷酶）可特異性地水解β-D-半乳糖苷鍵，同時(shí)還有轉(zhuǎn)糖苷活性，可催化乳糖生成低聚半乳糖。本文對(duì)產(chǎn)β-半乳糖苷

4、酶菌株進(jìn)行26SrDNA生物學(xué)鑒定，表明該菌株為乳酸克魯維酵母（Kluyveromycslactis）。K.lactis在中性條件下生長（pH5.0~8.0），乳糖對(duì)K.lactis分泌β-半乳糖苷酶有誘導(dǎo)作用。由于β-半乳糖苷酶為胞內(nèi)酶，較難提取，采用乙醇處理K.lactis細(xì)胞改變其通透性，制得透性化細(xì)胞。考查了處理?xiàng)l件對(duì)透性化細(xì)胞制備的影響，最佳處理?xiàng)l件為：室溫下乙醇處理1min，乙醇加入量為40%。對(duì)透性化細(xì)胞β-半乳糖苷酶進(jìn)行