L-苯丙氨酸寡肽的合成分離及其與DNA相互作用的初步研究.pdf

1、本文以電噴霧質(zhì)譜為檢測手段，研究了三氯氧磷(POCl3)輔助下L-苯丙氨酸的自組裝成肽反應(yīng)，實驗結(jié)果表明：1)L-苯丙氨酸在POCl<,3>輔助下能發(fā)生成肽反應(yīng)，最長肽鏈為六肽；2)在四氫呋喃溶劑中，L-苯丙氨酸成肽較好，氨基酸的轉(zhuǎn)化率較高； 3)升高溫度會加快L-苯丙氨酸成肽反應(yīng)速率，但反應(yīng)溫度高于50℃會發(fā)生大量副反應(yīng)；4)時間對L-苯丙氨酸成肽反應(yīng)影響不大，反應(yīng)超過6小時會產(chǎn)生一些副產(chǎn)物。并利用ESI-MS<,2>研究了L-苯丙氨

2、酸寡肽的正離子的多級質(zhì)譜裂解規(guī)律，也進一步證實了L-苯丙氨酸與POCl<,3>反應(yīng)產(chǎn)物是不同長度的寡肽。 利用反相高效液相色譜，以甲醇和水作為流動相，檢測波長254nm，以C<,18>分析柱作為苯丙寡肽庫的分離柱，對色譜條件進行了優(yōu)化；在此基礎(chǔ)上以C<,18>半制備柱為制備柱，制備得到苯丙氨酸二肽純品，并用電噴霧質(zhì)譜、紅外光譜、<'1>H NMR和<'13>C NMR進行結(jié)構(gòu)表征。 利用紫外可見分光光度法對苯丙氨酸，苯丙

3、氨酸二肽與小牛胸腺DNA的相互作用進行粗略探索，結(jié)果表明苯丙氨酸及其二肽與小牛胸腺DNA均能發(fā)生弱的相互作用，表現(xiàn)為紫外光譜258nm處吸光值不同程度的增色或減色效應(yīng)，以及210nm附近的最大吸收波長發(fā)生紅移。苯丙氨酸二肽與小牛胸腺DNA的作用方式主要有兩種，一是與DNA分子表面磷酸基團的靜電作用；二是與DNA分子中堿基發(fā)生π-π相互作用，這兩種相互作用不是孤立存在的，而是共同競爭存在于同一體系中。 通過研究作用時間、反應(yīng)液的p

4、H、離子強度、磷酸根離子濃度等因素對相互作用的影響究發(fā)現(xiàn)，在pH=7的緩沖溶液中，苯丙氨酸寡肽優(yōu)先與DNA堿基發(fā)生π-π相互作用，并隨反應(yīng)時間延長，在兩種作用形式之間相互轉(zhuǎn)化，直至達到熱力學(xué)平衡；改變反應(yīng)體系的pH會使DNA-苯丙氨酸寡肽體系258nm處的吸光值發(fā)生明顯變化，其變化規(guī)律為以pH=5.6為中心，升高或降低反應(yīng)液的酸度，都會使DNA-苯丙氨酸寡肽體系258nm處的吸光值均增加呈增色效應(yīng)；增大反應(yīng)體系的離子強度會導(dǎo)致DNA-苯