QMA對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：探討H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞（大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，pheochromocytoma cell）氧化應(yīng)激損傷及多胺類化合物（polyamine analogues，QMA）對(duì)其的保護(hù)作用。
　　方法：采用不同濃度H2O2（100、300、500、700μmol/L）造成PC12細(xì)胞損傷模型，運(yùn)用 MTT法對(duì)不同濃度H2O2對(duì)PC12細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)，確定其對(duì)PC12細(xì)胞的最適合的損傷濃度；研究多胺類化合物QMA的細(xì)胞

2、保護(hù)作用，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合MTT檢測(cè)法評(píng)價(jià)多胺類化合物QMA、陽(yáng)性藥NAC、尼莫地平對(duì)PC12細(xì)胞的存活率的影響；通過吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙錠（Ethidium bromide，EB）雙染法配合活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)對(duì)PC12細(xì)胞的凋亡形態(tài)變化和特征進(jìn)行記錄；用羅丹明123（Rhodamine123，Rh123）染色法通過高內(nèi)涵成像系統(tǒng)及流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的線粒體膜電位的變化進(jìn)行測(cè)定；通過D

3、CFH-DA染色使用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平進(jìn)行測(cè)定，作為對(duì)多胺類化合物抗氧化作用的補(bǔ)充說明；通過活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)，用免疫組織化學(xué)法測(cè)定活化caspase-3的表達(dá)，研究多胺類化合物抗氧化作用的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：1.H2O2（終濃度為500μmol/L）作用PC1224h后，細(xì)胞的抑制率顯著升高，而終濃度為1μmol/L，5μmol/L，25μmol/L的QMA可明顯改善細(xì)胞的凋亡形態(tài)，H2O2造成的PC12細(xì)胞的細(xì)胞

4、抑制顯著降低，并顯現(xiàn)出對(duì)濃度的依賴性。2.PC12細(xì)胞經(jīng)
　　500μmol/L H2O224小時(shí)的損傷后，觸發(fā)了胞內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷，誘導(dǎo)線粒體的膜電位的降低，增加了細(xì)胞內(nèi)ROS含量。3.多胺類化合物QMA可顯著減低細(xì)胞內(nèi)的ROS含量，抑制H2O2介導(dǎo)的線粒體的膜電位的降低，明顯改善了H2O2介導(dǎo)的凋亡形態(tài)，抑制活化caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)論：通過體外實(shí)驗(yàn)證明，多胺類化合物QMA為 H2O