淫羊藿的質(zhì)量分析與2-喹諾酮類衍生物化學(xué)合成及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、本論文由兩部分組成，第一部分為淫羊藿的質(zhì)量分析研究，第二部分由2-喹諾酮類衍生物化學(xué)合成及其抗腫瘤作用研究。
　?。ㄒ唬?br>　　淫羊藿（Epimedii Folium）為常用傳統(tǒng)中藥，收載于歷年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部。具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效。該中藥廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床配伍組方治療多種疾患，亦為諸多中成藥和保健藥品的原料藥材。為了有效控制淫羊藿藥材的質(zhì)量，本論文對(duì)其有效成分群進(jìn)行了含量分析研究，以期在《中國(guó)藥典》再

2、版時(shí)為淫羊藿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代超高效液相色譜法（UPLC-DAD），對(duì)淫羊藿有效成分群的總含量進(jìn)行了分析研究，建立了含量測(cè)定方法。以淫羊藿藥材為對(duì)象，同譜檢測(cè)了5種含量較高的黃酮類有效成分。所建立的含量測(cè)定方法線性關(guān)系良好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率等試驗(yàn)均符合要求（RSD<3％）。本含量測(cè)定方法具有一譜測(cè)定多種成分的特點(diǎn)，同時(shí)具有分析時(shí)間短、分離效果好、進(jìn)樣量少、溶劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)。采用本含量測(cè)定

3、方法，對(duì)14批次淫羊藿有效成分群總含量進(jìn)行了分析比較研究，其檢測(cè)結(jié)果能有效評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥材的質(zhì)量；從而為該藥材建立了一種可靠的質(zhì)量分析方法，能較全面反映其內(nèi)在質(zhì)量。
　　（二）
　　喹諾酮類化合物是很多中藥中重要有效成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，很多蕓香科植物的中藥抗腫瘤活性成分是2-喹諾酮類化合物。因此，本論文以2-喹諾酮作為先導(dǎo)化合物進(jìn)行了化學(xué)合成研究，以期發(fā)現(xiàn)高效抗腫瘤化合物，為研究新型抗腫瘤藥物提供目標(biāo)化合物。
　　本文以

4、喹啉系列化合物為反應(yīng)起始物，經(jīng)甲基化和氧化反應(yīng)制得2-喹諾酮類中間產(chǎn)物；經(jīng)硝化反應(yīng)得到硝化了的2-喹諾酮類衍生物；再經(jīng)cine-substitution反應(yīng)獲得1-甲基化-4-氰化-2-喹諾酮類衍生物，這些化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR和HR-MS得以確證。
　　采用 MTT法評(píng)價(jià)了合成的部分2-喹諾酮類化合物抑制 MCF-7， CT-26，A549，H1299，PC-12及HepG-2腫瘤細(xì)胞增殖的作用。研究結(jié)果表明

5、，部分的化合物對(duì)這6種不同的腫瘤細(xì)胞的抗增殖活性明顯高于喹啉系列物，其中1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹諾酮（化合物15）對(duì)6種腫瘤細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出顯著的抑制作用，其中對(duì) A549的抑制活性最高，IC50為2.05μmol·L-1。1-甲基-6,8-二硝基-4-氰基-2-喹諾酮可選擇性抑制A549和CT-26細(xì)胞，IC50分別為9.34μmol·L-1和18.4μmol·L-1。
　　采用Annexin V-FITC/P

6、I雙標(biāo)記法及Western blot蛋白質(zhì)免疫印跡學(xué)法，以A549細(xì)胞為受試對(duì)象，對(duì)化合物1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹諾酮（化合物15）的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行初步研究。結(jié)果顯示，化合物15能夠明顯抑制A549細(xì)胞增殖，并呈劑量和時(shí)間依賴性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)到化合物15誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生凋亡，其凋亡率在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。蛋白質(zhì)免疫印跡法Western blot表明在不同濃度（0、1.25、2.5和5μg·mL-1）的