自噬在酒精致PC12細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞中的生命現(xiàn)象，是真核細(xì)胞內(nèi)降解胞質(zhì)細(xì)胞器和長(zhǎng)壽命蛋白質(zhì)的一種溶酶體途徑。它是一個(gè)貫穿大分子、核糖體和細(xì)胞器被降解過(guò)程中高度保守的機(jī)制。自噬通常被認(rèn)為是在饑餓情況下為細(xì)胞提供了暫時(shí)生存的機(jī)會(huì)，這些情況包括氨基酸和營(yíng)養(yǎng)物的缺失、缺氧和代謝應(yīng)激。程序性細(xì)胞死亡是區(qū)別去細(xì)胞壞死的一種細(xì)胞死亡方式，分為Ⅰ型即凋亡性細(xì)胞死亡和Ⅱ型即自噬性細(xì)胞死亡。有研究表明，自噬作為一種程序性細(xì)胞死亡的方式，在某些情況下，如凋亡阻斷，可能將

2、細(xì)胞帶至最終的死亡。酒精是一種親神經(jīng)物質(zhì)，對(duì)人體許多系統(tǒng)、器官均有損傷作用，其中神經(jīng)系統(tǒng)是其損傷的主要靶器官之一。酒精的神經(jīng)毒性作用主要表現(xiàn)在氧化損傷、改變細(xì)胞質(zhì)膜的狀態(tài)、引起細(xì)胞凋亡等幾個(gè)方面。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)酒精致神經(jīng)細(xì)胞損傷在自噬性死亡方面的研究尚為鮮見(jiàn)。
　　 目的：本文以大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞PC12為靶細(xì)胞，并將PC12細(xì)胞分為四組：正常對(duì)照組、酒精處理組、酒精+自噬抑制劑處理組、酒精+凋亡抑制劑處理組。以探討自噬在酒精致P

3、C12細(xì)胞損傷過(guò)程中的保護(hù)作用，為揭示酒精的神經(jīng)毒性作用的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為酒精致神經(jīng)細(xì)胞損傷的修復(fù)提供理論依據(jù)。
　　 方法：構(gòu)建重組pEGFP-LC3表達(dá)載體，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞，以鑒定酒精致PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中自噬的發(fā)生；MTT法檢測(cè)自噬在酒精抑制PC12細(xì)胞增殖過(guò)程中所起的作用；通過(guò)高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)測(cè)定活性氧水平來(lái)檢測(cè)自噬在酒精致PC12細(xì)胞氧化損傷作用中所起的作用；通過(guò)免疫熒光、高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)

4、、Western blot檢測(cè)酒精致PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中，自噬與凋亡的相互關(guān)系。
　　 結(jié)果：(1)在酒精致PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中有自噬的發(fā)生；(2)在酒精致PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中，抑制自噬會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生存率明顯下降，同時(shí)細(xì)胞的氧化損傷水平顯著升高；(3)在酒精致PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中，抑制自噬，細(xì)胞Caspase介導(dǎo)的凋亡水平升高，抑制Caspase介導(dǎo)的凋亡，的自噬水平升高。
　　 結(jié)論：(1)酒精致PC12細(xì)胞損傷