自噬在酒精致PC12細胞損傷中的保護作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、自噬是廣泛存在于真核細胞中的生命現(xiàn)象,是真核細胞內(nèi)降解胞質(zhì)細胞器和長壽命蛋白質(zhì)的一種溶酶體途徑。它是一個貫穿大分子、核糖體和細胞器被降解過程中高度保守的機制。自噬通常被認為是在饑餓情況下為細胞提供了暫時生存的機會,這些情況包括氨基酸和營養(yǎng)物的缺失、缺氧和代謝應(yīng)激。程序性細胞死亡是區(qū)別去細胞壞死的一種細胞死亡方式,分為Ⅰ型即凋亡性細胞死亡和Ⅱ型即自噬性細胞死亡。有研究表明,自噬作為一種程序性細胞死亡的方式,在某些情況下,如凋亡阻斷,可能將

2、細胞帶至最終的死亡。酒精是一種親神經(jīng)物質(zhì),對人體許多系統(tǒng)、器官均有損傷作用,其中神經(jīng)系統(tǒng)是其損傷的主要靶器官之一。酒精的神經(jīng)毒性作用主要表現(xiàn)在氧化損傷、改變細胞質(zhì)膜的狀態(tài)、引起細胞凋亡等幾個方面。目前國內(nèi)外對酒精致神經(jīng)細胞損傷在自噬性死亡方面的研究尚為鮮見。
   目的:本文以大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細胞PC12為靶細胞,并將PC12細胞分為四組:正常對照組、酒精處理組、酒精+自噬抑制劑處理組、酒精+凋亡抑制劑處理組。以探討自噬在酒精致P

3、C12細胞損傷過程中的保護作用,為揭示酒精的神經(jīng)毒性作用的進一步研究提供實驗依據(jù),也為酒精致神經(jīng)細胞損傷的修復(fù)提供理論依據(jù)。
   方法:構(gòu)建重組pEGFP-LC3表達載體,并瞬時轉(zhuǎn)染PC12細胞,以鑒定酒精致PC12細胞損傷過程中自噬的發(fā)生;MTT法檢測自噬在酒精抑制PC12細胞增殖過程中所起的作用;通過高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)測定活性氧水平來檢測自噬在酒精致PC12細胞氧化損傷作用中所起的作用;通過免疫熒光、高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)

4、、Western blot檢測酒精致PC12細胞損傷過程中,自噬與凋亡的相互關(guān)系。
   結(jié)果:(1)在酒精致PC12細胞損傷過程中有自噬的發(fā)生;(2)在酒精致PC12細胞損傷過程中,抑制自噬會導(dǎo)致細胞生存率明顯下降,同時細胞的氧化損傷水平顯著升高;(3)在酒精致PC12細胞損傷過程中,抑制自噬,細胞Caspase介導(dǎo)的凋亡水平升高,抑制Caspase介導(dǎo)的凋亡,的自噬水平升高。
   結(jié)論:(1)酒精致PC12細胞損傷

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