嗜水氣單胞菌中聚羥基脂肪酸合成酶的缺失突變對其在環(huán)境壓力下生存能力弱化的研究.pdf

1、聚羥基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates)是廣泛存在于微生物體內的一類生物高分子化合物,具有完全生物可降解性、生物相容性等優(yōu)良性能,在很多領域有著廣泛的應用前景。PHBHHx是短鏈(SCL)羥基脂肪酸單體3-羥基丁酸(3HB)和中長鏈(MCL)羥基脂肪酸單體3-羥基己酸(3HHx)的共聚物。
　　野生菌Aeromonas hydrophila4AK4在以月桂酸和豆油為混合碳源培養(yǎng)至12h時可以產生16.48％的P

2、HBHHx,而經過同源重組的PHBHHx聚合酶(PhaC)缺失突變菌Aeromonas hydrophila CQ4則沒有 PHBHHx的積累。本文通過使用Aeromonas hydrophila野生菌4AK4和phaC缺失突變菌CQ4在以月桂酸和豆油為混合碳源的條件下第一次測試了Aeromonas hydrophila PHBHHx-positive和PHBHHx-negative時對各種環(huán)境因子包括溫度變化,紫外照射,有機溶劑乙醇,

3、滲透壓和過氧化氫的耐受能力。并且首次使用熒光定量PCR(Real-time PCR)的方法在分子水平上檢測熱激蛋白調節(jié)因子rpoS的表達來探討PHBHHx提高菌種耐受性的機理。
　　實驗發(fā)現PHBHHx野生菌4AK4在各種環(huán)境因子包括高溫(48oC)、低溫(4oC)、紫外(UV),有機溶劑(10%乙醇),高滲透壓(1.00-1.25M NaCl或KCl)和過氧化氫(H2O2)刺激下的抗逆性高于PHBHHx合成酶缺失突變菌CQ4。說

4、明PHBHHx的積累賦予了野生菌對環(huán)境因子更強的耐受力。而且Real time PCR實驗發(fā)現這種較高的耐受性與RNA聚合酶σ因子rpoS表達量的提高是分不開的。
　　在壓力因子存在的條件下,胞內PHBHHx的存在會增強rpoS的表達,而rpoS的表達會與 RNA聚合酶結合并特異性激活胞內各種保護蛋白的表達,從而使得野生菌比突變菌具有更強的耐受能力。所以我們有理由認為胞內PHBHHx的存在會使得野生菌的壓力耐受性相比于突變菌有所提