嗜熱絲孢菌脂肪酶富集多不飽和脂肪酸工藝的研究.pdf

1、大量研究表明，多不飽和脂肪酸（如DHA、EPA、DPA等）具有緩解心臟病，抑制癌癥和益智等功效。人體自身只能合成少部分多不飽和脂肪酸，大部分則需從體外攝取。近年來，市場上涌現(xiàn)出大量富含多不飽和脂肪酸的保健品，且銷售通暢，因此開發(fā)多不飽和脂肪酸產(chǎn)品具有巨大的商業(yè)價值。目前，多不飽和脂肪酸的制備方法主要有物理化學(xué)法和酶法，而酶法因其反應(yīng)條件溫和、無污染、安全性高等優(yōu)點受到越來越多的關(guān)注。此外，本實驗室在嗜熱絲孢菌脂肪酶(Thermomyce

2、d lanuginosus lipase，TLL)的表達量及酶活力方面有詳細研究，有效降低了酶的生產(chǎn)成本。在此基礎(chǔ)上，本文使用實驗室發(fā)酵的TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸，并對其工藝進行優(yōu)化研究。主要研究工作及結(jié)果如下：
　　1.以對硝基苯酚酯為底物測定TLL酶學(xué)性質(zhì)。TLL水解pNP酯的最適底物為對硝基苯酚辛酸酯(pNC)，最適反應(yīng)溫度為30℃，最適pH為8.0,在30℃處理條件下熱穩(wěn)定性良好；K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+

3、、CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)等對TLL的水解活力有較強的激活作用；Ni2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+、TritonX-100、Tween20則對其有強烈抑制作用，SDS的作用不明顯；TLL對正己烷的耐受性較強，而對丙酮、叔丁醇的耐受性則較弱。
　　2.優(yōu)化了TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸工藝。通過單因素實驗考察了TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸的影響因素，其最佳反應(yīng)時間為4h，加酶量12,000U/g油，反應(yīng)

4、溫度40℃，添加劑0.3g/g油，油水比1:3，緩沖液pH8.0。在此基礎(chǔ)上進行正交實驗，考察反應(yīng)時間、加酶量、反應(yīng)溫度、添加劑四個因素對DHA絕對含量的影響，水解產(chǎn)物經(jīng)氫氧化鉀-乙醇脫酸處理，DHA含量達41.6％，是原油DHA絕對含量的2.08倍，回收率達到81.6%。
　　3.由于氫氧化鉀-乙醇脫酸處理會產(chǎn)生DHA乙酯，影響產(chǎn)品品質(zhì)，進一步探討了分子蒸餾方法對水解產(chǎn)物脫酸處理的效果，并對分子蒸餾脫酸的溫度與刮膜器轉(zhuǎn)速進行了單