胞質(zhì)M-CSF通過抑制HIF-1α-BNIP3-Bax信號(hào)通路增強(qiáng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的凋亡抗性.pdf

1、目的：探討巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞HIF-1α/BNIP3/Bax信號(hào)通路的影響和意義。
　　方法：用含10％NBCS(新生牛血清)的1640培養(yǎng)基分別培養(yǎng)MCF-7-M細(xì)胞（胞質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染M-CSF的MCF-7細(xì)胞），MCF-7-C細(xì)胞（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體的MCF-7細(xì)胞），親本MCF-7細(xì)胞。蛋白印跡檢測(cè)M-CSF對(duì)ADM處理前后MCF-7細(xì)胞HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3和Ca

2、spase9蛋白的影響；免疫共沉淀檢測(cè)M-CSF對(duì)ADM處理前后MCF-7細(xì)胞 Bcl-2與 BNIP3和Bax相互作用的影響；Hoechst33342染色法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞質(zhì)M-CSF對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：蛋白印跡法結(jié)果顯示，未用 ADM處理時(shí)，與 MCF-7以及 MCF-7-C細(xì)胞相比，MCF-7-M細(xì)胞 HIF-1α（p<0.05）和BNIP3（p<0.01）表達(dá)顯著降低，Bax、Caspase3、Cas

3、pase9蛋白的表達(dá)沒有明顯差異（p>0.05）；用 ADM處理后，MCF-7-M細(xì)胞中的HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3和Caspase9蛋白表達(dá)情況顯著性降低（p<0.01）； MCF-7細(xì)胞與MCF-7-C細(xì)胞HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3、Caspase9的表達(dá)無顯著差異(p>0.05)。免疫共沉淀結(jié)果顯示：未用ADM處理時(shí)，三種細(xì)胞Bcl-2結(jié)合的BNIP3無顯著性差異（p>0.05)，M

4、CF-7-M細(xì)胞Bcl-2蛋白結(jié)合的Bax顯著高于MCF-7細(xì)胞或MCF-7-C細(xì)胞（p<0.05）；用ADM處理后，MCF-7-M細(xì)胞Bcl-2蛋白結(jié)合的BNIP3顯著低于MCF-7細(xì)胞或MCF-7-C細(xì)胞（p<0.01），MCF-7-M細(xì)胞Bcl-2蛋白結(jié)合的Bax高于MCF-7細(xì)胞與MCF-7-C細(xì)胞（p<0.05）。Hoechst33342染色結(jié)果顯示，隨著 ADM濃度的增加，三種細(xì)胞的凋亡細(xì)胞數(shù)均增多；與MCF-7以及MCF-

5、7-C細(xì)胞相比，每個(gè)ADM濃度預(yù)處理?xiàng)l件下，MCF-7-M細(xì)胞凋亡率顯著性降低（p<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，用ADM預(yù)處理后，MCF-7-M細(xì)胞凋亡率比MCF-7細(xì)胞或MCF-7-C細(xì)胞顯著降低（p<0.01）。
　　結(jié)論：胞質(zhì) M-CSF抑制 HIF-1α/BNIP3/Bax信號(hào)通路增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞的凋亡抗性；胞質(zhì)M-CSF促進(jìn)Bcl-2與BNIP3蛋白分子解離，增強(qiáng)Bcl-2與Bax蛋白分子的結(jié)合，抑制乳腺癌MCF-