UCH-L3對乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的HIF-1表達(dá)及對細(xì)胞生長的影響.pdf

1、HIF-1α是細(xì)胞應(yīng)對低氧微環(huán)境時表達(dá)的一種關(guān)鍵性核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。HIF-1α與HIF-1β結(jié)合形成低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1），HIF-1可對多種基因進(jìn)行靶向調(diào)控，介導(dǎo)腫瘤的低氧生存、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性[1]。HIF-1α的降解減少是影響其表達(dá)的主要原因，泛素化-蛋白酶體系統(tǒng)是HIF-1α的主要降解途徑。泛素化是泛素分子在一系列泛素酶的催化作用下與底物蛋白結(jié)合，后通過蛋白酶體途徑降解底物蛋白的過程。去泛素化是泛素化的可逆過

2、程，指泛素化的底物蛋白復(fù)合物在去泛素化酶（DUBs）的作用下解離泛素分子使得再循環(huán)利用。泛素化與去泛素化過程共同控制著細(xì)胞內(nèi)多種調(diào)節(jié)蛋白的降解與穩(wěn)定，涉及細(xì)胞的生長、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等諸多過程。UCH-L3是一種去泛素化酶，參與底物蛋白的去泛素化過程，從而對細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展及生長轉(zhuǎn)化發(fā)揮一定的調(diào)節(jié)作用。
　　目的：探究人乳癌細(xì)胞系UCH-L3基因?qū)IF-1α表達(dá)的影響及在體外對人乳癌細(xì)胞系MCF-7生物學(xué)行為的影響及調(diào)控機(jī)制。<

3、br>　　方法：采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)將UCH-L3慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)入MCF-7乳腺癌細(xì)胞系；采用熒光定量PCR、蛋白印跡（Western blot）技術(shù)分別檢測乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞正常組以及以上兩種細(xì)胞系正常組、陰性對照組、UCH-L3慢病毒過表達(dá)組之間HIF-1α、UCH-L3的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平變化；應(yīng)用劃痕實驗、CCK-8試驗檢測轉(zhuǎn)染前后MCF-7細(xì)胞生物學(xué)行為的變化。
　　結(jié)果：UCH-L

4、3和HIF-1α基因在MCF-7細(xì)胞系中的mRNA及蛋白表達(dá)量均明顯低于在MDA-MB-231細(xì)胞系中的表達(dá),具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與陰性對照組和正常細(xì)胞組比較，UCH-L3過表達(dá)組的UCH-L3mRNA水平和蛋白水平明顯升高(P<0.05)，同時HIF-1α蛋白水平的表達(dá)顯著上調(diào)，HIF-1αmRNA水平表現(xiàn)出略降低趨勢，并且UCH-L3過表達(dá)組細(xì)胞增殖和遷移能力增強(qiáng)(P<0.05)；對UCH-L3過表達(dá)組施加蛋白酶體抑制劑

5、（MG-132）抑制蛋白降解實驗，結(jié)果顯示UCH-L3過表達(dá)組的HIF-1αmRNA水平和蛋白水平隨藥物作用時間延長表現(xiàn)出持續(xù)積累趨勢。對過UCH-L3過表達(dá)組施加蛋白合成抑制劑-放線菌酮（CHX）抑制蛋白合成實驗，結(jié)果顯示UCH-L3過表達(dá)組的HIF-1α蛋白水平隨藥物作用時間延長呈現(xiàn)降低的趨勢。
　　結(jié)論：UCH-L3促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的HIF-1α表達(dá)，增強(qiáng)其生長和遷移能力；UCH-L3影響MCF-7細(xì)胞生物學(xué)行為可能依賴依