高致病性PRRSV毒株的分離及PRRSV RT-LAMP檢測(cè)方法的分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的高度接觸性病毒傳染病，以仔豬呼吸障礙及妊娠母豬、公豬生殖障礙為主要特征，是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的疾病之一。該病毒分為北美型和歐洲型兩個(gè)血清型，我國(guó)流行的PRRSV毒株主要為北美型PRRSV毒株。
　　 本研究對(duì)吉林地區(qū)兩個(gè)豬場(chǎng)的病豬進(jìn)行了病料采集，在Marc-145細(xì)胞上進(jìn)行了病毒的分離，經(jīng)盲傳后，病毒可在Marc-145細(xì)胞上產(chǎn)生明顯的病變，經(jīng)RT-PC

2、R和免疫熒光鑒定，證明所分離到的病毒為PRRSV。將分離到的病毒分別命名為JILINTN1株和JILINTN2株。
　　 根據(jù)GenBank中PRRSV HUN4株的序列設(shè)計(jì)引物，通過RT-PCR成功擴(kuò)增了PRRSVJILINTN1和JILINTN2株的ORF567和NSP2基因。并將其克隆到pMD18-T載體上，通過測(cè)序和生物信息學(xué)分析我們發(fā)現(xiàn):針對(duì)GP5核苷酸序列的進(jìn)化樹顯示JILINTN1和JILINTN2株與其他北美型P

3、RRSV毒株處在同一分支上，這兩個(gè)毒株的GP5，M和N基因與其他北美型的毒株同源性很高而與歐洲型毒株很低，說明這兩個(gè)毒株屬于北美型的毒株。對(duì)NSP2區(qū)域的比對(duì)結(jié)果顯示，本研究分離到的兩個(gè)毒株具有90個(gè)核苷酸的不連續(xù)缺失，為高致病性PRRSV。
　　 本研究建立了PRRSV的RT-LAMP診斷方法，基于序列的比對(duì)結(jié)果，設(shè)計(jì)了四條針對(duì)M基因的引物進(jìn)行RT-LAMP試驗(yàn)。結(jié)果顯示RT-LAMP的最佳反應(yīng)條件為63℃反應(yīng)40分鐘。通過對(duì)