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1、該課題分別研究了抗Caspase-3和抗Caspase-7錘頭狀核酶在細(xì)胞內(nèi)、外的切割活性及它們對TNF-á和放線菌素D協(xié)同誘導(dǎo)的小鼠原代肝細(xì)胞凋亡的阻抑作用.該研究共分為三個部分.第一部分是對外源性加入的TNF-á和放線菌素D協(xié)同誘導(dǎo)原代小鼠肝細(xì)胞凋亡的研究.在第二部分,針對Balb/c小鼠的凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-7mRNA分別設(shè)計并合成了2個特異性的錘頭狀核酶的編碼DNA,通過分子克隆技術(shù)將核酶編碼基因克隆到
2、pBSKneoU6中.第三部分是研究抗Caspase-3核酶Rz656和抗Caspase-7核酶Rz333在原代肝細(xì)胞內(nèi)對靶基因的切割活性.總之,外源性TNF-á可以通過死亡受體途徑誘導(dǎo)原代小鼠肝細(xì)胞發(fā)生凋亡,引起染色質(zhì)斷裂、DNA"梯帶"形成,并刺激細(xì)胞內(nèi)Caspase-3和Caspase-7 mRNA的表達(dá)及蛋白酶原的翻譯,引起酶原的活化,執(zhí)行細(xì)胞凋亡.針對Caspase-3設(shè)計的核酶Rz656和針對Caspase-7設(shè)計的核酶Rz
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