錘頭狀核酶、反義RNA對大鼠肺動脈平滑肌NHE-1活性及細胞增殖的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實驗通過將Na<'+>/H<'+>交換器-1 (NHE-1)特異性錘頭狀核酶和反義RNA體外轉(zhuǎn)染肺動脈平滑肌細胞,并檢測細胞中NHE-1表達、Na<'+>/H<'+>交換活性、 pHi的變化,及其與細胞增殖變化的關(guān)系,探討NHE-1在肺動脈平滑肌細胞增殖中的作用.研究內(nèi)容包括:1.根據(jù)大鼠NHE-1mKNA序列,設計井合成兩條錘頭狀核酶,應用PCR方法擴增獲得反義RNA序列;并將其分別克隆于反轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN的多克隆位點中.2.

2、采用FuGENE6轉(zhuǎn)染試劑將重組載體轉(zhuǎn)染入培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細胞.RT-PCR方法檢測NHE-1mRNA表達.3. 檢測轉(zhuǎn)染細胞pHi變化,<'22>Na攝取量的改變.檢測誘導細胞酸化后pHi恢復速率,不同細胞外Na<'+>濃度下pHi恢復速率等Na<'+>/H<'+>交換活性指標變化.檢測<'3>H-TdR摻入量等細胞增殖指標的變化.4.檢測細胞在10﹪血清、PDGF和EGF作用后, pHi和<'22>Na攝取量變化;Na<'+>/H

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