HCMV感染人海馬NSCs分化Astrocytes并誘導細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：研究人類巨細胞病毒(HCMV)能否感染體外培養(yǎng)的由人海馬神經干細胞(NSCs)分化成的星形膠質細胞(Astrocytes)，并觀察病毒感染對細胞凋亡的影響，為探討先天性巨細胞病毒感染致腦發(fā)育異常的機制提供理論依據。 方法：體外分離、培養(yǎng)人海馬NSCs，添加血清誘導其定向分化為星形膠質細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學特點并利用間接免疫熒光染色方法通過檢測其各自的標志蛋白進行鑒定。然后用HCMV AD169株感染人星形膠質細

2、胞(MOI=1)，鏡下觀察感染后細胞的形態(tài)學變化，利用間接免疫熒光技術檢測細胞內病毒基因產物-IE蛋白的表達，采用流式細胞術PI染色和細胞涂片Annexin V-FITC/PI染色法檢測感染細胞的凋亡情況。同時收集感染細胞的培養(yǎng)液，接種到正常人胚肺二倍體細胞(MRC-5)中，觀察有無典型的HCMV致細胞病變出現(xiàn)。 結果：體外原代培養(yǎng)的人海馬NSCs以神經球的形式懸浮生長，絕大多數細胞都表達NSCs的標記物-巢蛋白(nestin)

3、，誘導其分化后，細胞高表達星形膠質細胞的標志物-神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)。HCMV AD169感染星形膠質細胞7天后，細胞出現(xiàn)腫脹、變大、變圓等典型病變，胞核內檢測到HCMV即刻早期基因的表達產物-IE蛋白。流式細胞術PI單染結果顯示：MOI=1時，感染組細胞凋亡比例為14.72％±5.78％，明顯高于正常對照組7.59％±2.33％，兩組比較有統(tǒng)計學意義(t=3.18，P<0.05)。細胞涂片Annexin V-FITC/PI

4、染色結果也顯示，感染組細胞凋亡比例高于對照組。收集感染細胞的培養(yǎng)液并接種到HCMV的完全容許性細胞-MRC-5中，一周后細胞也出現(xiàn)上述典型病變，證明HCMV可在星形膠質細胞內增殖、復制并釋放到胞外。 結論：(1)在體外培養(yǎng)的由人NSCs分化成的星形膠質細胞中，HCMV AD169能夠建立增殖性感染，該細胞是HCMV的容許性細胞。 (2) HCMV感染誘導體外培養(yǎng)的由人NSCs分化成的星形膠質細胞凋亡，這可能與先天性巨細胞