E1B-55KD基因缺陷腺病毒H101對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251體外抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是人類顱內(nèi)惡性程度最高的腫瘤，多發(fā)于成年人，好發(fā)于40-50歲男性，腫瘤生長(zhǎng)迅速，常在白質(zhì)內(nèi)呈浸潤(rùn)方式生長(zhǎng)。常規(guī)的治療為手術(shù)切除為主，術(shù)后放療或合并應(yīng)用化療，但由于腫瘤邊界不清，術(shù)中難以完全清除，一般在8個(gè)月后復(fù)發(fā)，生存時(shí)間平均1年左右?；虔煼ㄊ且环N全新概念的治療方法，它根據(jù)瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制的不同而設(shè)計(jì)選擇性的使目的細(xì)胞死亡的治療方法，其中條件復(fù)制的基因缺失型溶瘤腺病毒H101(國(guó)外同類制劑為Onvx-O1

2、5或d11520)是目前研究比較多的基因療法之一，它根據(jù)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞p53途徑的不同而設(shè)計(jì)，切除人類5型腺病毒結(jié)合宿主細(xì)胞p53蛋白的E1B-55KD片段，使得這種基因改良腺病毒不能在p53陽(yáng)性的正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而能夠選擇性的在p53途徑缺失的腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，并且最終溶解腫瘤細(xì)胞并散布子代病毒繼續(xù)感染其它腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮其“旁觀者”效應(yīng)。目前H1O1類生物制劑在除外腦部腫瘤的其它體內(nèi)腫瘤單獨(dú)或聯(lián)合放化療的臨床前及臨床實(shí)驗(yàn)已經(jīng)開展，包

3、括頭頸部腫瘤、口腔癌、消化系統(tǒng)腫瘤、肺癌、前列腺癌等等，都已開展了Ⅰ-Ⅲ期的臨床實(shí)驗(yàn)，并取得了令人鼓舞的結(jié)果。但大多學(xué)者對(duì)其應(yīng)用在神經(jīng)腫瘤領(lǐng)域還是存在質(zhì)疑，主要原因是H101腺病毒對(duì)正常神經(jīng)元的毒性以及是否會(huì)引發(fā)由腺病毒所致的腦炎及腦水腫癥狀。本課題的目的在于檢測(cè)H101對(duì)體外培養(yǎng)的正常的海馬神經(jīng)元的毒性反應(yīng)及初步檢測(cè)H101對(duì)體外培養(yǎng)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251的抑制率。 方法：本實(shí)驗(yàn)選用的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤為p53陰性的U251，由同本

4、細(xì)胞庫(kù)建系并保存，原代培養(yǎng)12天的新生大鼠海馬神經(jīng)元作為正常細(xì)胞對(duì)照組，海馬神經(jīng)元用神經(jīng)元特異性MAP-2抗體進(jìn)行鑒定，分別應(yīng)用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(MTT)、細(xì)胞病變反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(CPE)檢測(cè)不同滴度的H101對(duì)瘤細(xì)胞及神經(jīng)元的抑制率及毒性，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)H101mRNA在不同的時(shí)間點(diǎn)(24h、48h、72h)在膠質(zhì)瘤細(xì)胞及神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá)水平，對(duì)差異顯著性進(jìn)行T檢驗(yàn)。結(jié)果：1．H101病毒在24小時(shí)就可以對(duì)體外培養(yǎng)的膠

5、質(zhì)母細(xì)胞瘤U251產(chǎn)生抑制作用，加入的病毒滴度越大抑制率越高，并且隨著病毒作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞病變反應(yīng)越發(fā)明顯，H101mRNA的表達(dá)呈上升趨勢(shì)。2．H101病毒不能在體外培養(yǎng)的原代大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)有效復(fù)制，海馬神經(jīng)元不出現(xiàn)細(xì)胞病變反應(yīng)，不同病毒滴度組的海馬神經(jīng)元與對(duì)照組相比抑制率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)不到病毒H101mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：1．溶瘤病毒制劑H101對(duì)體外培養(yǎng)的人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251存在