交感神經(jīng)過度且不均一支配與鈣調(diào)控蛋白表達變化在長期左房壓力超負荷致心房顫動中的作用.pdf

1、目的：有關(guān)長期左房壓力超負荷導(dǎo)致心房電生理變化及心房顫動(房顫)發(fā)生的具體機制尚不十分清楚，而交感神經(jīng)系統(tǒng)和鈣調(diào)控蛋白及其磷酸化水平變化在其中的作用也有待于探討。因此，本研究采用腹主動脈縮窄法建立兔壓力負荷型左室肥厚和心力衰竭模型，研究高血壓左室肥厚和心力衰竭病理狀態(tài)下，長期左房壓力超負荷對兔心房電生理參數(shù)和房顫誘發(fā)率的影響，同時評價心房及左上肺靜脈交感神經(jīng)分布的變化，觀察鈣調(diào)控蛋白RyR2及其調(diào)節(jié)蛋白FKBP12.6，L-型Ca2+通

2、道，SERCA2a及其調(diào)節(jié)蛋白PLB表達水平的變化，并對RyR2和PLB的磷酸化水平進行分析，探討左房交感神經(jīng)支配與鈣調(diào)控蛋白表達變化在長期左房壓力超負荷所致心房顫動中的作用。 方法；雄性日本大耳白兔42只隨機分為假手術(shù)組(14只)、左室肥厚組(肥厚組，16只)和心力衰竭組(心衰組，12只)。肥厚組腹主動脈縮窄約50～60％，心衰組腹主動脈縮窄約70～80％，假手術(shù)組僅開腹而不予腹主動脈縮窄。術(shù)后8周進行超聲心動圖檢查測定左房內(nèi)

3、徑(LAD)、左室舒張末內(nèi)徑(LVED)、左室間隔舒張末厚度(IVSDT)、左室后壁舒張末厚度(LVPWDT)、右室內(nèi)徑(RVD)和左室射血分數(shù)(LVEF)等心臟超聲指標(biāo)，然后在假手術(shù)組和肥厚組中各隨機選取8只動物進行Langendorff灌流的離體電生理檢查測定竇性心動周長(SCL)、房室傳導(dǎo)文氏周長(AVWCL)、心房各點有效不應(yīng)期(AERP)、心房有效不應(yīng)期離散度(AERPD)、房間傳導(dǎo)時間(IACT)及房顫誘發(fā)率和誘發(fā)次數(shù)的評估

4、。其余兔假手術(shù)組(n=6)、左室肥厚組(n=8)和心衰組(n=5)進行血流動力學(xué)檢查測定心率(HR)、主動脈收縮壓(SBP)、主動脈舒張壓(DBP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室壓力最大上升速率及下降速率1(LV+dp/dtmax及-dp/dtmax)，然后取血測定血漿心房利鈉肽(ANP)和去甲腎上腺素(NE)水平，隨后取出心房、左上肺靜脈與左房交界處組織用于Westernbolt檢測β-受體激酶1(β-ARK1)、L-型鈣通道(L

5、TCCs)、FKBP12.6、2型Ryanodine受體(RyR2-5029)及其磷酸化形式(RyR2-2809P)、肌漿網(wǎng)Ca2+ATP酶2a(SERCA2a)、受磷蛋白(PLB)及其磷酸化形式(PLBp-Ser16)的蛋白表達水平，病理學(xué)檢查和酪氨酸羥化酶(TH)免疫組化染色及心房組織環(huán)磷酸腺苷(cAMP)測定。 結(jié)果：1)術(shù)后8周心臟超聲結(jié)果：與假手術(shù)組比較，肥厚組術(shù)后8周LAD、IVSDT和LVPWDT均明顯增加；心衰組

6、LAD、LVED及RVD明顯增加，LVEF明顯下降；與肥厚組比較，心衰組術(shù)后8周LAD、LVED及RVD明顯增加，LVEF明顯下降。2)血流動力學(xué)結(jié)果：與假手術(shù)組比較，肥厚組SBP、DBP、LV+dp/dtmax及-dp/dtmax明顯升高；與假手術(shù)組比較，心衰組SBP和LVEDP明顯升高，LV+dp/dtmax及-dp/dtmax明顯下降；與肥厚組比較，心衰組SBP、DBP、LV+dp/dtmax及-dp/dtmax明顯下降；而LVE

7、DP顯著升高。3)電生理檢查結(jié)果：與假手術(shù)組比較，肥厚組高位左房有效不應(yīng)期明顯縮短(77.75±14.36vs96.50±8.47ms,P＜0.01)、心房有效不應(yīng)期離散度顯著增加(32.75±12.65vs12.63±7.31ms，P＜0.01)，房間傳導(dǎo)時間明顯延長(39.11±2.99vs25.60±3.70ms，P＜0.01)，房顫誘發(fā)率(4/8vs0/8，P＜0.05)也顯著增加。4)血漿ANP、NE和心肌組織cAMP水平：心

8、衰組血漿ANP水平明顯高于假手術(shù)組和肥厚組；心衰組血漿NE水平明顯高于假手術(shù)組和肥厚組，而肥厚組血漿NE水平明顯高于假手術(shù)組；假手術(shù)組心房組織cAMP水平明顯高于肥厚組和心衰組。5)病理學(xué)檢查：①肥厚組和心衰組左房心肌橫斷面積(LACSA)明顯大于假手術(shù)組。②肥厚組和心衰組的左上肺靜脈口直徑和平均厚度均明顯大于假手術(shù)組。③肥厚組和心衰組左房膠原容積分數(shù)(LACVF)和左房血管周圍膠原容積分數(shù)(LAACVF)均明顯高于假手術(shù)組。④TH免疫

9、組化染色結(jié)果：肥厚組左房交感神經(jīng)分布異質(zhì)性明顯高2于假手術(shù)組；心衰組左房最高交感神經(jīng)密度和交感神經(jīng)分布異質(zhì)性均明顯高于假手術(shù)組；肥厚組左上肺靜脈最高、平均交感神經(jīng)密度均明顯低于假手術(shù)組和心衰組。6)Westernblot檢測結(jié)果：①肥厚組和心衰組β-ARK1蛋白表達水平均明顯高于假手術(shù)組。②肥厚組和心衰組LTCCs蛋白表達水平均明顯低于假手術(shù)組。③肥厚組和心衰組FKBP12.6蛋白表達水平均明顯高于假手術(shù)組；心衰組FKBP12.6蛋白表

10、達水平顯著低于肥厚組。④與假手術(shù)組比較，肥厚組RyR2-5029蛋白表達水平明顯升高，而心衰組明顯下降；與肥厚組比較，心衰組RyR2-5029蛋白表達水平明顯下降。⑤肥厚組和心衰組RyR2-2809P蛋白表達水平均明顯高于假手術(shù)組。⑥肥厚組和心衰組RyR2相對磷酸化水平均明顯高于假手術(shù)組；心衰組RyR2相對磷酸化水平也明顯高于肥厚組。⑦心衰組SERCA2a蛋白表達水平明顯低于假手術(shù)組和肥厚組。⑧肥厚組和心衰組PLB和PLBp-Ser16

11、蛋白表達水平均明顯低于假手術(shù)組；心衰組PLB和PLBp-Ser16蛋白表達水平也明顯低于肥厚組。⑨肥厚組和心衰組PLB相對磷酸化水平均明顯低于假手術(shù)組；心衰組PLB相對磷酸化水平也明顯低于肥厚組。 結(jié)論：1)長期左房壓力超負荷可導(dǎo)致高位左房有效不應(yīng)期縮短，心房有效不應(yīng)期離散度增加及房內(nèi)傳導(dǎo)延遲等心房電生理變化、房顫誘發(fā)率增加。2)長期左房壓力超負荷可導(dǎo)致左房心肌肥大，心肌間質(zhì)纖維化等一系列病理改變，即心房結(jié)構(gòu)性重構(gòu)。3)長期左房