丹參素與半胱氨酸衍生物的綴合物對HUVECs和SH-SY5Ys的抗氧化和抗凋亡作用的機制的初步研究.pdf

1、[目的]丹參素作為中藥丹參中的有效成分，有著廣泛的生物活性，如擴張冠狀動脈、抑制血小板聚集、抗心肌細胞凋亡和抗炎作用等，而這些作用至少部分與其抗氧化和抗凋亡作用有關。但是由于丹參素的羥基的化學不穩(wěn)定性，所以很難從天然產(chǎn)物中分離和純化丹參素，而且丹參素因為脂溶性差，所以很難進入細胞膜，因此我們在已有的研究基礎上，我們將丹參素與半胱氨酸衍生物分子結(jié)合，以加強其穩(wěn)定性和脂溶性?；谝陨?，我們設計并合成了化合物1，2，3，并測定其對H2O2刺激

2、的SH-SY5Ys和HUVECs的保護作用。
　　[方法]因化合物1，2為手性異構體，而化合物3為消旋體，所以我們先分析化合物1，2，3的藥效和結(jié)構差異的關系。首先，我們將SH-SY5Y細胞分為6組，分別為:陽性藥組(NAC，5mM);化合物1、2、3組（50μM）;Model組以及Control組。將細胞種好后，部分細胞用50μM的化合物1，2，3和5mM的NAC預給藥4小時，然后將除了Control組之外的細胞用200μM的H

3、2O2刺激12小時。待實驗結(jié)束后，用MTT和LDH法來測定藥物對細胞的保護作用，用光鏡法和Hoechst染色法來測定藥物對細胞的凋亡的抑制作用，最后再用MDA法、SOD法、GSH法和Gpx免疫熒光染色法來測定藥物抗氧化作用。
　　而后，我們又用HUVEC細胞對化合物3進一步進行機制的研究，將HUVEC細胞分為6組，陽性藥組(NAC，5mM)，5μM、50μM和100μM的化合物3組;Model組合Control組。將細胞種好后，部

4、分細胞用5μM、50μM和100μM化合物3以及NAC預給藥4小時，然后將除了Control組之外的細胞用200μM的H2O2刺激12小時。帶實驗結(jié)束后，用MTT和LDH法來測定藥物對細胞的保護作用，用MDA和GSH法來測定藥物的抗氧化作用，用PI和V-FITC雙染和JC-1來測定藥物的抗凋亡作用。同時采用Western-Blot法來測定Bcl-2、bax、caspase3、 caspase9的凋亡通路關鍵蛋白的表達。
　　[結(jié)果

5、]經(jīng)過對SH-SY5Y的研究，化合物1，2和3可以顯著的提高細胞的相對活性，降低細胞LDH的漏出率，降低MDA的含量，提高SOD和GSH的活性。而在免疫熒光染色檢測中，我們可以看到藥物可以提高Gpx的活性，而顯著提高細胞的存活率。而且在以上的實驗中，我們發(fā)現(xiàn)化合物1，2和3的效果并無顯著性差異，而手性異構體1，2比較難以獲得，因此我們將研究的重點放在消旋體化合物3上。在接下來對HUVEC細胞的研究中，我們發(fā)現(xiàn)，化合物3在50，100μM

6、時，可以顯著提高細胞的相對活性并降低LDH的漏出率，并有很強的抗氧化作用，可以顯著的減少細胞凋亡，并且使凋亡通路的蛋白bcl-2、pro-caspase3、pro-caspase9的含量顯著提高，使bax含量顯著降低。
　　[結(jié)論]本研究發(fā)現(xiàn)，化合1，2和3都有抗凋亡的作用，而且3者的抗凋亡作用無顯著性差異，而且3者的抗凋亡作用部分與3者的抗氧化作用有關。因此，我們認為，化合物1，2和3有成為在抗凋亡藥物的潛質(zhì)。有期望在治療心腦血