血漿miRNAs預(yù)測非小細(xì)胞肺癌患者放療敏感性的研究.pdf

1、背景和目的:
　　肺癌是發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤之一,其主要的病理類型為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。放射治療是肺癌的重要治療手段,據(jù)統(tǒng)計,約60％-70%的 NSCLC患者在疾病的不同階段需接受放射治療。但即使是根治性放療也不能徹底消除腫瘤,常規(guī)分割放療(conventional fractionated radiotherapy,CFRT)2年復(fù)發(fā)率高達(dá)60%–70%,進(jìn)

2、一步提高肺癌放療療效是目前需迫切解決的問題。輻射抵抗嚴(yán)重影響放療療效,放療前對患者輻射敏感程度進(jìn)行評估,有助于制定最佳的放療計劃,提高放療療效,但目前臨床缺乏敏感、有效的療效預(yù)測分子。
　　微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一類保守的內(nèi)源性非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中均起重要調(diào)控作用,最新研究發(fā)現(xiàn),其與放化療抵抗、腫瘤干細(xì)胞特性維持、上皮-間葉轉(zhuǎn)化(Epithelial-

3、mesenchymal transition,EMT)等生物學(xué)特征也密切相關(guān)。miRNAs表達(dá)具有組織特異性,在血漿中可穩(wěn)定表達(dá),并可進(jìn)行定量檢測分析,因此血漿 miRNAs有望成為肺癌療效預(yù)測及治療靶點的新型分子標(biāo)記。
　　方法:
　　1.檢索GEO數(shù)據(jù)庫,以放療敏感肺癌細(xì)胞株H460和放療抵抗肺癌細(xì)胞株H1299為研究對象,獲取經(jīng)2Gy電離輻射后隨時間變化的基因表達(dá)譜,經(jīng)組織特異性分析、miRNAs預(yù)測分析、GO分析、P

4、athway分析等一系列生物信息學(xué)處理,獲取NSCLC放療敏感性 miRNAs表達(dá)譜。結(jié)合本課題組前期研究及文獻(xiàn)報道,篩選用于預(yù)測NSCLC患者放療敏感性的miRNAs分子。
　　2.收集我院擬行單純放療的NSCLC患者血漿,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測患者血漿關(guān)鍵miRNAs表達(dá)水平。按照RECIST1.1實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)以及局部無進(jìn)展生存期(progression free survival,PFS)將患者分為

5、放療敏感組(CR+PR;>中位局部PFS)和放療抵抗組(SD+PD;≤中位局部PFS),比較兩組間血漿miRNAs表達(dá)水平是否具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1.獲得了NSCLC放療敏感性差異基因表達(dá)譜和mRNA-miRNA-network,篩選出19個放療敏感性相關(guān) miRNAs,其中放療抵抗關(guān)鍵 miRNAs14個:hsa-miR-1、hsa-miR-1297、 hsa-miR-153、 hsa-miR-193a-3p

6、、 hsa-miR-206、 hsa-miR-302e、hsa-miR-328、 hsa-miR-372、 hsa-miR-495、 hsa-miR-520a-3p、 hsa-miR-520b、hsa-miR-520d-3p、hsa-miR-520e、hsa-miR-613;放療敏感關(guān)鍵miRNAs5個:hsa-let-7c、hsa-miR-137、hsa-miR-203a、hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-98。結(jié)合前期研

7、究成果,共篩選獲得4個 miRNAs用于后續(xù)實驗( hsa-let-7c、hsa-miR-18a、hsa-miR-495、hsa-miR-203a)。
　　2.入組行單純放療NSCLC患者39例,按近期療效分組,放療敏感組18例,放療抵抗組21例。放療敏感組中hsa-let-7c、hsa-miR-18a的表達(dá)水平顯著高于放療抵抗組(P<0.05),放療抵抗組與放療敏感組相比,hsa-miR-495、hsa-miR-203a的表達(dá)無

8、統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　3.隨訪截止2014年3月15日,8例患者因疾病未進(jìn)展刪失。中位局部PFS4個月(1-9.2個月),按照中位局部PFS分組,放療敏感組14例,放療抵抗組17例,放療抵抗組與放療敏感組相比,hsa-let-7c、hsa-miR-18a、hsa-miR-495、hsa-miR-203a的表達(dá)差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　hsa-let-7c、hsa-miR-18a