人血管抑制因子vasostatin片段在大腸桿菌中的融合表達、純化及活性檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Vasostatin是一種新型的血管生成抑制因子,為鈣網素(Calreticulin)蛋白N′端結構域片段第1-180個氨基酸,具有抑制內皮細胞增殖、抑制血管生成的生物功能,其主要活性部位存在于第120-180個氨基酸片段中。為了確定vasosatatin蛋白的更短活性片段,本實驗以含全長人vasostatin蛋白cDNA序列的質粒pUC18為模板,PCR擴增四條不同長度的vasostatin片段,分別插入到質粒pGEX-4T-3的Ba

2、mH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點間,構建成重組質粒pGEX-4T-3/vasostatin-A、pGEX-4T-3/vasostatin-B、pGEX-4T-3/vasostatin-C以及pGEX-4T-3/vasostatin-A-C,并轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導GST融合蛋白表達。SDS-PAGE分析表明,表達產物主要以包涵體形式存在,改變誘導條件可增加可溶性表達量,包涵體形式的表達量約占菌全蛋白總量的55%。通過G

3、ST親和凝膠純化目的蛋白并用凝血酶(Thrombm)酶切后獲得單體vasostatin片段,采用MTT法檢測其抑制內皮細胞增殖的活性,結果表明各GST-vasostatin及vasostatin片段具有程度不同的抑制bFGF誘導的內皮細胞增殖活性,其中以片段vasostatin-B(含氨基酸135-164)的抑制活性最為顯著?？芍藇asostatin片段中的氨基酸135-164區(qū)域是活性較強的區(qū)域,為進一步對其生物活性及作用機理的研究

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