神經(jīng)營養(yǎng)因子Neurturin在大腸桿菌、畢赤酵母中的表達、純化及生物學活性研究.pdf

1、神經(jīng)營養(yǎng)因子是一類能夠促進神經(jīng)細胞存活、生長、分化的多肽分子,在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化和損傷修復過程中具有重要作用.該論文就hNTN在原核和真核系統(tǒng)的表達、純化及生物學活性的測定等進行了系統(tǒng)詳細的研究.首先,構(gòu)建了含有羥胺切割位點的hNTN融合蛋白表達載體,在大腸桿菌中獲得了NTN的高效表達,經(jīng)羥胺切割并進行了純化,獲得了純度達90﹪的重組hNTN蛋白.其次,根據(jù)公布的hNTN成熟蛋白氨基酸順序,選擇畢赤酵母偏愛的密碼子,人工合成hNTN的

2、成熟蛋白編碼基因,構(gòu)建hNTN酵母分泌型表達載體,在畢赤酵母中獲得穩(wěn)定、高效的分泌表達,表達量達100mg/L,并建立了表達產(chǎn)物的分離、純化工藝,經(jīng)過CM-sepharose離子交換層析和Superdex-75凝膠過濾純化,可以獲得純度達95﹪的重組NTN.最后,對重組hNTN的活性進行鑒定.實驗表明,大腸桿菌和畢赤酵母表達的hNTN在體外能促進培養(yǎng)的雞胚背根神經(jīng)節(jié)長出神經(jīng)突起并能促使培養(yǎng)的大鼠胚胎中腦多巴胺能神經(jīng)元的存活.動物試驗表明