乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)rtI233V變異的演變及病毒學(xué)特點(diǎn)分析.pdf

1、目的：分析乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)rtI233V變異的演變規(guī)律及其與阿德福韋酯(ADV)耐藥的相關(guān)性。
　　方法：分析了9830例慢性HBV感染者血清樣本中HBV rtI233V變異的檢出率。選擇其中2例代表性患者的動(dòng)態(tài)收集血清樣本，擴(kuò)增HBV RT基因并克隆測(cè)序（＞20個(gè)克隆/樣本）以觀察rtI233V變異的演變過程。構(gòu)建pTriEx-HBV1.1倍野生株(WT)、3種臨床變異株(rtI2

2、33V、rtN236T、rtI233V+rtN236T)和定點(diǎn)回復(fù)突變株(rtN236T)復(fù)制子，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入HepG2肝癌細(xì)胞，分別加入不同濃度梯度或最高濃度的拉米夫定(LAM)、阿德福韋酯(ADV)、恩替卡韋(ETV)和替諾福韋(TDF)作用，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同藥物濃度作用后細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBV DNA水平，分析變異病毒復(fù)制力與表型耐藥變化特點(diǎn)。
　　結(jié)果：9830例慢乙肝患者血清樣本中共檢出rtI233V位點(diǎn)變異

3、28例，檢出率為0.28％，其中rtI233V單獨(dú)變異19例，與rtN236T等經(jīng)典耐藥變異聯(lián)合出現(xiàn)9例。該變異的檢出患者均有ADV治療史，其中16例(57.1％)接受ADV單藥治療6個(gè)月以上，12例(42.9％)接受包括ADV的多藥序貫聯(lián)合治療1年以上?；颊?相對(duì)病毒復(fù)制力與表型耐藥分析顯示，rtI233V變異株的復(fù)制力與野生株接近(98.2％)，rtN236T變異株則較野生株顯著降低(55.4％);rtI233V+rtN236T變異

4、株的相對(duì)病毒復(fù)制力為野生株的100.4％，表明rtI233V變異可明顯恢復(fù)rtN236T變異株受損的復(fù)制力;rtN236T、rtI233V+rtN236T和rtI233V變異株對(duì)ADV的敏感性分別為野生株的1/6.82，1/5.28和1/1.57，rtN236T和rtI233V+rtN236T變異株對(duì)ADV耐藥，而rtI233V變異株對(duì)ADV仍然敏感，與rtN236T聯(lián)合變異對(duì)ADV耐藥性的影響不大?；颊?:rtI233V變異株的相對(duì)病

5、毒復(fù)制力為野生株的102.5％;對(duì)ADV的敏感性為野生株的1/0.76。rtI233V變異株對(duì)ADV及LAM、ETV和TDF均敏感。ADV對(duì)臨床變異株rtI233V+rtN236T和定點(diǎn)回復(fù)突變株rtN236T(lab)的抑制率相似，進(jìn)一步證實(shí)rtI233V變異株對(duì)ADV耐藥性影響不大。
　　結(jié)論：rtI233V位點(diǎn)變異與ADV應(yīng)答不佳相關(guān)，但不直接降低病毒對(duì)ADV的敏感程度，可以恢復(fù)經(jīng)典ADV耐藥病毒株的復(fù)制力，是一種復(fù)制力補(bǔ)償