含有EB病毒相關抗原的重組蛋白疫苗的構(gòu)建和表達.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染與多種上皮細胞和淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤密切相關,如鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)、布氏淋巴瘤(Burkitt's Lymphoma,BL)、何杰金病(Hodgkin's Disease,HD)以及免疫缺陷病人的惡性淋巴瘤等.在鼻咽癌中,EBV僅僅選擇性地穩(wěn)定表達幾種潛伏期的核抗原和膜蛋白:核抗原1(nuclear antigen 1,EBNA1)、

2、潛伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)和潛伏膜蛋白2(latent membrane protein 2,LMP2).然而LMP1能使人B細胞和上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化.因此該文將LMP2(以下簡寫為P2)和EBNA1(以下簡寫為E1)作為研究基于細胞免疫的鼻咽癌治療性蛋白疫苗的靶抗原.考慮到全長的LMP2蛋白可能難以表達,除了克隆含有全長LMP2編碼序列的基因片段(LMP2)之外,還制備了亞克隆基因片段(

3、P2-251、P2-254和P2-345).對于EBNA1,繞開蛋白中的Gly-Ala重復序列,分別克隆基于蛋白N末端和C末端編碼序列的基因片段(E1-169和E1-564).此外,為了利用炭疽毒素致死因子LFn/Δ3片段的投遞功能,將上述抗原基因片段與LFn/Δ3融合,利用pET15b表達質(zhì)粒在大腸桿菌宿主BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)Codon Plus中進行表達嘗試.獲得了LFn P2-251、Δ3 P2-251