miR-126穩(wěn)定過表達(dá)結(jié)腸癌細(xì)胞系的構(gòu)建及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的： microRNA(以下簡(jiǎn)寫為miRNA)，是一類非編碼小分子RNA，在腫瘤的發(fā)生過程中起著十分重要的作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在NGX6轉(zhuǎn)染前后不同轉(zhuǎn)移能力的結(jié)腸癌細(xì)胞株中miR-126的表達(dá)存在差異，提示miR-126可能與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移有關(guān);亦有研究表明，miR-126與胃癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤密切相關(guān)。本研究將利用穩(wěn)定表達(dá)miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系研究miR-126的生物學(xué)功能，并初步驗(yàn)證數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)的靶基因，以期

2、更深入探討miR-126在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用，為結(jié)腸癌的診斷、治療、預(yù)后提供新的靶點(diǎn)。
　　 方法：⑴利用慢病毒載體構(gòu)建miR-126穩(wěn)定過表達(dá)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞系。⑵研究miR-126過表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)功能影響，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移侵襲能力，流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡。⑶Targetscan及Pictar數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-126靶基因有SPRE

3、D1、PLK2、CRK、IRS1、SLC7A5、TOM1，驗(yàn)證miR-126對(duì)其表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：①穩(wěn)定過表達(dá)miR-126的SW480細(xì)胞較對(duì)照組升高2.8倍(P＜0.05)。②MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-126過表達(dá)組細(xì)胞生長(zhǎng)活力在72、96小時(shí)較對(duì)照組顯著降低。劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-126可抑制SW480細(xì)胞的遷移侵襲能力。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示miR-126能夠增加G1期細(xì)胞比例，減少S期

4、細(xì)胞比例，抑制其增殖，同時(shí)能促進(jìn)其凋亡。③real-time PCR結(jié)果表明IRS1、SLC7A5、TOM1在miR-126過表達(dá)組較對(duì)照組表達(dá)下降(P＜0.05)，SPRED1、PLK2、CRK在miR-126過表達(dá)組較對(duì)照組表達(dá)上升(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴成功構(gòu)建miR-126穩(wěn)定過表達(dá)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞系。⑵miR-126可抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力并促進(jìn)其凋亡。⑶在結(jié)腸癌中IRS1、SL