犬牙囊干細(xì)胞膜片的構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、牙周病可導(dǎo)致牙周支持組織的破壞,例如牙槽骨的急性或慢性吸收,進而牙齒脫落,最終形成牙周缺損。因此,牙槽骨的再生,成為了臨床醫(yī)生修復(fù)牙周缺損的重要目標(biāo)。過去二十年中臨床應(yīng)用各種方法包括外科手術(shù)、咬合屏障膜、骨移植、骨傳導(dǎo)生物材料等修復(fù)牙周缺損,均未取得理想的效果。隨著細(xì)胞膜片技術(shù)的快速發(fā)展,細(xì)胞膜片已成為組織工程研究的熱點之一。該技術(shù)也為牙周缺損的修復(fù)帶來了新的活力和生機。牙囊組織含有形成牙周膜、牙骨質(zhì)、牙槽骨的前體細(xì)胞,這些前體細(xì)胞在特

2、定條件的誘導(dǎo)下可分化為成牙骨質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等,具有很強的干細(xì)胞特性,統(tǒng)稱為牙囊干細(xì)胞(DFSCs)。而隨著智齒阻生發(fā)病率的升高,拔除的帶有牙囊組織的智齒為我們提供了豐富的DFSCs來源。
　　目的:從比格犬尖牙牙胚中分離出牙囊干細(xì)胞(Dental Follicle Stem Cells,DFSCs),對其進行形態(tài)觀察,干細(xì)胞鑒定、增值和分化能力檢測,并以犬的牙囊細(xì)胞作為種子細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞膜片,并對該膜片的生物學(xué)

3、特性進行研究。
　　方法:從4至6月齡犬離體尖牙分離牙胚,膠原酶消化,獲得牙囊細(xì)胞,體外培養(yǎng)取第3代細(xì)胞進行細(xì)胞克隆形成、細(xì)胞流式鑒定等。然后用含抗壞血酸的培養(yǎng)基誘導(dǎo)2周構(gòu)建細(xì)胞膜片。構(gòu)建成功后,通過倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡(SEM)對牙囊細(xì)胞膜片進行形態(tài)學(xué)檢測。于細(xì)胞膜片構(gòu)建10天時,對細(xì)胞膜片分別進行成骨、成脂誘導(dǎo),連續(xù)誘導(dǎo)2周,行茜素紅染色及油紅O染色,鏡下觀察成骨、成脂情況。
　　結(jié)果:DFSCs在體外被成功分

4、離、純化、培養(yǎng),細(xì)胞克隆形成率約為5.1％。細(xì)胞流式鑒定為CD29(+)、CD44(+)、CD34(-)。MTT顯示DFSCs增殖能力較強。細(xì)胞周期檢測結(jié)果為:G1=87.1％,G2=5.54％。牙囊細(xì)胞成膜誘導(dǎo)2周后,獲得白色膜狀細(xì)胞膜片。HE染色顯示該膜片由2~4層細(xì)胞組成,掃描電鏡(SEM)示細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞基質(zhì)分泌多。細(xì)胞膜片成脂誘導(dǎo)14天,經(jīng)油紅O染色后,鏡下可見大量脂滴形成;細(xì)胞膜片成骨誘導(dǎo)14天,經(jīng)茜素紅染色后鏡下可見大