應(yīng)用噬菌體15肽庫(kù)篩選抗原GalNAc(α1-3)(Fucα1-2)Galβ模擬多肽的研究.pdf

1、目的：
　　 從噬菌體隨機(jī)15肽庫(kù)篩選血型A抗原模擬表位，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。
　　 方法：
　　 1.采用噬菌體展示技術(shù)，以抗A抗體作為靶分子，對(duì)噬菌體隨機(jī)15肽庫(kù)連續(xù)進(jìn)行四輪篩選。
　　 2.從第4輪洗脫物滴定平板隨機(jī)挑選單克隆噬菌體擴(kuò)增，通過(guò)ELISA的方法，對(duì)單克隆噬菌體與抗A抗體的結(jié)合進(jìn)行初步鑒定。
　　 3.根據(jù)ELISA初步鑒定結(jié)果，選取陽(yáng)性克隆擴(kuò)增提取DNA測(cè)序。
　　 4.參

2、照測(cè)序結(jié)果，選取相應(yīng)的噬菌體克隆，通過(guò)梯度ELISA，和紅細(xì)胞抑制試驗(yàn)進(jìn)一步鑒定噬菌體克隆與抗A的結(jié)合。
　　 5.最后通過(guò)Autodock軟件分析多肽序列與抗A抗體的對(duì)接效果。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過(guò)四輪篩選，產(chǎn)出/投入比逐漸上升，總富集率達(dá)到1600倍。ELISA方法初步鑒定，37個(gè)隨機(jī)噬菌體單克隆中，11個(gè)陽(yáng)性克隆，陽(yáng)性率達(dá)到27.5％。
　　 2.陽(yáng)性克隆提取DNA測(cè)序，11個(gè)單克隆中有9個(gè)

3、為同一序列TRWLVYFSRPYLVAT。
　　 3.梯度ELISA鑒定，clone8隨著稀釋倍數(shù)的增加，clone8 濃度的降低，吸光度逐漸降低，對(duì)照組則不呈相關(guān)性。同時(shí)紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)clone8對(duì)紅細(xì)胞凝集的抑制效果呈濃度依賴性。
　　 4.生物軟件分析，得到的多肽序列剛好嵌入抗A抗體上高變區(qū)的凹槽，與天然A抗原對(duì)接與A抗體上的同一位置。
　　 結(jié)論：
　　 通過(guò)四輪篩選富集的多肽序列，經(jīng)過(guò)