雷帕霉素防治腹膜透析大鼠腹膜纖維化及其機(jī)理研究.pdf

1、研究背景:腹膜纖維化迄今仍然是一個(gè)世界性的難題，是導(dǎo)致尿毒癥患者被迫中斷長(zhǎng)期腹膜透析的最主要因素。在非生理性腹膜透析液的長(zhǎng)期刺激下，就會(huì)導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生，其主要機(jī)理是腹膜間皮細(xì)胞從上皮細(xì)胞表型向肌纖維母細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化，即上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程的發(fā)生，由此啟動(dòng)細(xì)胞增殖和膠原等基質(zhì)的積聚等，主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及到Smad通路、PI3-K/Akt/mTOR途徑等。雷帕霉素（rapamycin），通過與FK結(jié)合蛋白(FK-binding pr

2、otein，F(xiàn)KBP)結(jié)合，阻斷哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖。在腎、肝、心等多個(gè)臟器領(lǐng)域的研究中雷帕霉素在抗增殖和抗纖維化方面已經(jīng)顯示了重要作用。目前雷帕霉素在抗腹膜纖維化領(lǐng)域的作用也受到越來越多的重視。
　　目的:明確雷帕霉素對(duì)于腹膜透析模型大鼠腹膜纖維化的防治效果，闡明雷帕霉素對(duì)于腹膜透析模型大鼠腹膜纖維化的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機(jī)制。<

3、br>　　實(shí)驗(yàn)方法:動(dòng)物層面，取45只正常SD大鼠，隨機(jī)分為5組:正常組，生理鹽水組，高糖組，低濃度雷帕治療組，高濃度雷帕治療組，6周后處死，評(píng)估腹膜功能，取腹壁組織，行HE及α-SMA、TGF-β的免疫組化染色，分析各組腹壁纖維化情況;細(xì)胞層面，取正常SD大鼠腹膜，原代培養(yǎng)腹膜間皮細(xì)胞，取第3-4代細(xì)胞，予以不同濃度高糖(30，60，120mM)干預(yù)，及不同濃度雷帕霉素(10，100nM)干預(yù)，作細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，同時(shí)于處理48h后提取蛋

4、白，分析高糖對(duì)α-SMA及E-cadherin的變化，以及雷帕霉素對(duì)腹膜細(xì)胞EMT的影響。
　　結(jié)果:動(dòng)物層面:高糖組大鼠的腹膜功能相較正常組及生理鹽水組明顯下降，低濃度雷帕及高濃度雷帕均顯著改善腹膜功能(P＜0.05);HE染色及α-SMA、TGF-β免疫組化顯示，高糖組呈現(xiàn)腹膜纖維化狀態(tài)，低濃度雷帕及高濃度雷帕均顯著改善腹膜纖維化狀態(tài)，且高濃度相較低濃度效果更明顯。細(xì)胞層面:高糖處理后細(xì)胞呈現(xiàn)EMT改變，表現(xiàn)為:α-SMA的表

5、達(dá)量相較正常組明顯升高，E-cadherin的表達(dá)量明顯下降，遷移率明顯增加，且呈濃度相關(guān)性(均P＜0.05)。雷帕明顯改善EMT表現(xiàn)，且呈濃度相關(guān)性(均P＜0.05)。
　　結(jié)論:通過動(dòng)物層面及細(xì)胞層面驗(yàn)證了雷帕霉素對(duì)高糖引起的腹膜纖維化有明顯的防治作用，在有效濃度范圍內(nèi)，其防治效果與劑量呈一定的正相關(guān)。驗(yàn)證了EMT在腹膜纖維化過程中的作用。雷帕霉素抑制EMT的機(jī)制主要表現(xiàn)為:抑制腹膜間皮細(xì)胞遷移，減少TGF-β的分泌，抑制成纖