腹部創(chuàng)傷應(yīng)激后血清microRNA表達(dá)改變及其意義.pdf

1、目的：
　　了解miRNA在正常和腹部創(chuàng)傷后大鼠血清中的表達(dá)差異，進(jìn)一步篩選出具有評估早期創(chuàng)傷后應(yīng)激的miRNA，以便進(jìn)一步了解創(chuàng)傷應(yīng)激的miRNA機(jī)制，并為監(jiān)測和治療創(chuàng)傷提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、建立大鼠部分肝切除模型以模擬腹部創(chuàng)傷；
　　2、檢測手術(shù)前后不同點(diǎn)大鼠血清中ALT、AST和CRP濃度水平，評估腹部創(chuàng)傷后大鼠應(yīng)激情況；
　　3、根據(jù)前面實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定檢測時(shí)間點(diǎn)，miRNA表達(dá)譜芯片篩選

2、手術(shù)前后大鼠血清中差異表達(dá)的miRNA，并采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證；
　　4、選擇大鼠創(chuàng)傷前后血清miRNA表達(dá)差異最顯著的miR-9，Real-timeRT-PCR檢測其在大鼠手術(shù)前后不同點(diǎn)血清中濃度水平，并和ALT、AST和CRP進(jìn)行相關(guān)分析以驗(yàn)證其是否具有評估創(chuàng)傷嚴(yán)重程度和早期應(yīng)激反應(yīng)的能力；
　　5、根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究結(jié)果，檢測大鼠創(chuàng)傷前后循環(huán)白細(xì)胞和重要臟器組織中miR-

3、9的表達(dá)情況，了解其創(chuàng)傷后血清中miR-9來源。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立大鼠部分肝切除手術(shù)模型；
　　2、手術(shù)前后大鼠血清ALT、AST和CRP濃度發(fā)生明顯升高，其中2/3PH術(shù)后24h組大鼠血清ALT、AST和CRP達(dá)到頂峰，分別為211.43±40.48U/L、1014.4±115.82U/L和8.165±0.84mg/L；
　　3、miRNA芯片檢測結(jié)果顯示27個(gè)miRNA在2/3PH術(shù)后24h大鼠血

4、清中表達(dá)明顯升高，特別是miR-9，其在2/3PH術(shù)后24h大鼠血清中的表達(dá)水平為術(shù)前70多倍，Real-timeRT-PCR檢測miR-9的結(jié)果與芯片結(jié)果相符；
　　4、正常情況下大鼠血清中miR-9的濃度水平很低，經(jīng)過部分肝切除術(shù)后大鼠血清中miR-9的濃度水平會迅速升高；且相同的時(shí)間點(diǎn)，2/3PH組中血清miR-9濃度要明顯高于1/3PH組，相關(guān)分析結(jié)果也顯示大鼠創(chuàng)傷前后血清miR-9的表達(dá)與ALT、AST和CRP呈正相關(guān)；

5、
　　5、術(shù)前正常情況下大鼠白細(xì)胞中miR-9表達(dá)水平較低，術(shù)后6h白細(xì)胞中miR-9的表達(dá)水平即明顯提升；并且在整個(gè)實(shí)驗(yàn)階段的48h都維持在較高水平；在多形核中性粒細(xì)胞中我們也可以觀察到類似的情況；
　　6、miR-9在大鼠心臟、肝臟和肺臟組織中表達(dá)水平低下，且手術(shù)前后其表達(dá)無明顯改變；在腦部組織miR-9的表達(dá)明顯強(qiáng)于其他器官，其中小腦中的表達(dá)水平最高；手術(shù)可以導(dǎo)致大鼠大腦皮質(zhì)、下丘腦和垂體中miR-9的表達(dá)明顯升高，小

6、腦和海馬組織中miR-9的表達(dá)在手術(shù)前后并無明顯改變。
　　結(jié)論：
　　1、成功建立大鼠部分肝切除手術(shù)模型模擬腹部創(chuàng)傷。通過檢測手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血清中ALT、AST和CRP濃度改變情況，對創(chuàng)傷后大鼠應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)行了初步評估，并根據(jù)結(jié)果選取腹部創(chuàng)傷后24h為早期應(yīng)激反應(yīng)最典型的時(shí)間點(diǎn)。
　　2、利用miRNA芯片技術(shù)檢測部分肝切除手術(shù)前后大鼠血清中miRNA的表達(dá)譜變化情況，并從中篩選出改變最顯著的miR-9。