日本血吸蟲蛋白Sj22的克隆表達(dá)及診斷應(yīng)用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文旨在尋找一種能夠輔助診斷日本血吸蟲病的抗原蛋白，同時(shí)制備其抗體，為研制日本血吸蟲免疫診斷試劑盒、進(jìn)一步開展該蛋白的深入研究奠定基礎(chǔ)，并在抗體制備過程中探討提高基因免疫效果的策略方法。我們克隆了日本血吸蟲myophilin樣蛋白（Sj22，Genebank號AY223463）的編碼基因，重組入質(zhì)粒pET22b后，在大腸桿菌BL21內(nèi)表達(dá)并純化獲得一大小約25KDa的重組融合蛋白質(zhì)rSj22。以rSj22作為診斷抗原用于血吸蟲抗體的E

2、LISA檢測，在動物實(shí)驗(yàn)中檢測特異性為100％，并且檢測感染血吸蟲的兔血清中抗Sj22抗體水平變化可反映兔感染和治療狀況。用于現(xiàn)癥血吸蟲病人血清中的抗體檢測時(shí)，rSj22檢測的特異性和敏感性分別為93.9％和57.4％。 另外，我們利用基因免疫的方法制備了Sj22蛋白的抗體，采用肌肉注射的方法免疫小鼠，實(shí)驗(yàn)動物分為四組：A組注射pVAX1-sj22質(zhì)粒100μg /只；B組注射pVAX1-sj22質(zhì)粒50μg /只，同時(shí)注射Cp

3、G佐劑20μg /只；C、D組注射pcDNA3.1-sj22質(zhì)粒100μg /只。分別在0，3，6周進(jìn)行免疫，第9周A、B、C組用30μg重組sj22蛋白加強(qiáng)免疫，D組仍用pcDNA3.1-sj22質(zhì)粒100μg加強(qiáng)免疫。第0，9，10周割尾采血，使用ELISA方法進(jìn)行抗體效價(jià)測定，Western blot驗(yàn)證抗體的特異性。結(jié)果表明：使用基因免疫的方法獲得了針對Sj22的特異性抗血清，CpG佐劑能夠有效降低質(zhì)粒用量，基因免疫-蛋白加強(qiáng)的

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